CD40在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 CD40在潰瘍性結(jié)腸炎組織中的表達(dá)及意義
　　目的:研究CD40分子在潰瘍性結(jié)腸炎組織中的表達(dá),及其與潰瘍性結(jié)腸炎嚴(yán)重度之間的相關(guān)性。
　　方法:應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)56例潰瘍性結(jié)腸炎組織和10例正常組織中CD40分子表達(dá)。
　　結(jié)果:CD40分子在潰瘍性結(jié)腸炎組織中的陽性表達(dá)率為62.5％,明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。與輕度潰瘍性結(jié)腸炎相比,CD40陽性表達(dá)率在中度潰瘍性結(jié)腸炎中明顯升高(P<0.05)

2、。
　　結(jié)論:潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸組織中CD40表達(dá)異常。
　　第二部分 抗CD40單克隆抗體在潰瘍性結(jié)腸炎中治療效應(yīng)及作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：初步探討抗CD40單克隆抗體在葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)中的治療效應(yīng)及作用機(jī)制。
　　方法：24只BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為:A組(對(duì)照組,n=6)

3、、B組(模型組,n=6)、C組(奧沙拉秦干預(yù)組,n=6)、D組(抗CD40單克隆抗體干預(yù)組,n=6)。A組小鼠自由飲用蒸餾水7天;B、C、D組小鼠自由飲用5％DSS溶液7天以制成UC小鼠模型;造模的同時(shí)于第1、3、5及7天分別給以A、B組腹腔注射無菌蒸餾水。C組小鼠每天灌服奧沙拉秦(60mg/kg)、D組小鼠于造模第1、3、5、7天腹腔注射抗CD40單克隆抗體(20ug/次),于造模第8天,處死所有各組小鼠。大體觀察各組小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)

4、(disease activity index,DAI),常規(guī)病理切片評(píng)估結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分(histopathological score,HPS)。RT-PCR測(cè)定各組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸中IFN-γmRNA、TNF-αmRNA的表達(dá),ELISA法測(cè)定各組小鼠血清中IFN-γ、TNF-α含量的變化。
　　結(jié)果：(1)與對(duì)照組DAI(0.29±0.48)和HPS(0.16±0.32)相比,模型組小鼠DAI(6.21±1.25)和HPS(

5、7.00±0.58)明顯增高(p<0.05);與模型組相比,奧沙拉秦干預(yù)組C組DAI(4.58±2.36)和HPS(4.35±0.76)均有不同程度的下降(p<0.05);抗CD40單克隆抗體干預(yù)組D組DAI(3.98±1.86)和HPS(3.25±0.66)亦有不同程度的下降(p<0.05)。
　　(2)模型組IFN-γmRNA、TNF-mRNA表達(dá)量(分別為3.21±0.26、1.23±0.36)明顯高于對(duì)照組(分別為1.35

6、±0.18、0.21±0.13)(p<0.05),奧沙拉秦干預(yù)后,IFN-γmRNA、TNF-mRNA表達(dá)在C組(2.58±0.24、0.72±0.15)、抗CD40單克隆抗體干預(yù)組D組(2.34±0.25、0.59±0.18)均顯著下降(p<0.05)。
　　(3)對(duì)照組小鼠血清中IFN-γ、TNF-α的水平分別為(215.18±32.51)、(20.06±5.20),模型組小鼠血清中IFN-γ、TNF-α的表達(dá)比例分別為(95

7、3.32±40.96)、(42.97±8.76),模型組小鼠血清中IFN-γ、TNF-α的表達(dá)比例與對(duì)照組相比明顯升高(P<0.05),奧沙拉秦干預(yù)后C組、抗CD40抗體干預(yù)組D組小鼠血清中IFN-γ、TNF-α的表達(dá)比例分別為C組(768.73±31.86)、(37.75±6.75)、D組(693.47±51.38)、(30.93±3.18),與模型組相比干預(yù)組均有明顯降低(P<0.05);
　　結(jié)論：(1)抗CD40抗體干預(yù)組