樹突狀細胞及TLR2在潰瘍性結腸炎發(fā)病機制中的作用.pdf

1、潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis，UC)是一種主要累及直腸、結腸黏膜的慢性非特異性炎癥。其發(fā)病機制尚不十分明確，一般認為與遺傳、環(huán)境及免疫反應異常有關，其中免疫應答異常與免疫調節(jié)失衡被認為是UC發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。 樹突狀細胞(Dendritic cells，DCs)是體內功能最強并且是唯一能活化初始型T細胞的專職抗原呈遞細胞(Antigenpresenting cell，APC)。DCs表面有大量與功能相關的表面

2、分子，S-100蛋白可以作為局部組織中DCs的標志。DCs活化初始T細胞的能力依賴于它的成熟狀態(tài)，CD83是成熟DCs表達的一種相對特異性表面分子。 Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)是新近發(fā)現的先天性免疫重要的跨膜受體和信號轉導受體，在巨噬細胞、DCs等APC表面表達尤其豐富。脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)及細菌脂肽可通過TLR2刺激DCs成熟。 目前，關于TLR

3、s及其下游信轉導分子的研究較多，對其上游信號轉導分子研究較少。酪氨酸激酶(Janus tyrosinekinase，JAK)/信號轉導和轉錄激活因子(Signal transducer andactivator of transcription，STAT)是細胞信號轉導的重要通路之一，參與UC的發(fā)生。UC患者結腸黏膜中STAT3及磷酸化STAT3的表達高于正常結腸黏膜。有研究發(fā)現在TLR2啟動子上存在一個STAT結合位點，致病因子可能通

4、過活化STAT3直接調節(jié)了TLR2基因表達。 目的：通過研究UC患者結腸黏膜中DCs的分布及TLR2的表達與臨床活動度及內鏡分級的關系，探討其在UC發(fā)病機制中的作用。 方法： 收集UC病例及正常對照結腸鏡活檢標本。入選病例根據Truelove-Witts標準按內鏡下活動度分為Ⅰ級組8例、Ⅱ級組22例、Ⅲ級組17例；根據“2000年成都全國炎癥性腸病學術會議”制訂的潰瘍性結腸炎診斷標準按臨床活動度分為輕度組15例、

5、中度組23例、重度組9例。 應用免疫組織化學法檢測結腸黏膜中以S-100及CD83為標志的DCs的分布；應用Western Blot技術和半定量反轉錄聚合酶鏈反應(Reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR)方法檢測結腸黏膜中TLR2蛋白及TLR2mRNA的表達。 結果： 1 UC患者基本資料分析及結腸黏膜病理學改變47例UC患者中26例主要臨床表現

6、為黏液膿血便，14例主要表現為血便，7例僅表現為腹痛，8例有發(fā)熱表現。 結腸鏡檢查可見中、重度患者結腸黏膜充血、水腫，有糜爛、潰瘍形成，多有膿性或膿血性黏液附著，輕度患者結腸黏膜高度充血、水腫，呈顆粒感，質脆，易出血，4例患者黏膜有炎性息肉形成。 光學顯微鏡下發(fā)現對照組結腸黏膜腺體排列整齊，隱窩、表面上皮完整，黏膜固有層有少量炎性細胞浸潤；UC組結腸黏膜充血、水腫，有糜爛、潰瘍形成，黏膜杯狀細胞減少或消失，腺體萎縮，大量

7、炎性細胞浸潤，并可見隱窩膿腫形成，有息肉形成者可見不典型增生及纖維結締組織形成。 2 UC患者結腸黏膜S-100的表達免疫組織化學染色顯示：S-100陽性細胞主要位于黏膜固有層，光鏡下免疫組織化學反應產物呈棕黃色，主要位于細胞質，正常對照組結腸黏膜固有層S-100弱表達。 與正常對照組比較，Ⅰ級組、Ⅱ級組及Ⅲ級組患者結腸黏膜中S-100陽性細胞數明顯增多，染色強度增強；Ⅰ級組與正常對照組比較無明顯差異(23.31 vs

8、16.00)，P>0.05；Ⅱ級組、Ⅲ級組較正常對照組明顯增強(23.31 vs 16.00，32.61.vs16.00.)，P<0.01.；Ⅰ級組與Ⅲ級組比較有明顯差異(23.31 vs42.24)，P<0.01，Ⅱ級與Ⅰ級組及Ⅲ級組之間無明顯差異(23.31. vs 32.61，32.61 vs 42.24)，P>0.05。 輕度組、中度組及重度組患者結腸黏膜中S-100的表達強度均顯著高于正常對照組(30.13 vs 16

9、.00，34.43 vs 16.00，42.00 vs 16.00)，P<0.01；輕度組、中度組及重度組之間無明顯差異，P>0.05。 3 UC患者結腸黏膜CD83的表達CD83陽性細胞主要位于黏膜固有層，呈棕黃色，主要位于細胞質，正常對照組結腸黏膜固有層CD83弱表達或不表達。 與正常對照組比較，Ⅰ級組、Ⅱ級組、Ⅲ級組患者結腸黏膜中CD83的表達強度逐漸遞增；Ⅰ級組與正常對照組比較無明顯差異(19.00 vs 16.

10、00)，P>0.05；Ⅱ級組、Ⅲ級組與正常對照組比較有明顯差異(34.14 vs 16.00，42.29 vs 16.00)，P<0.01；Ⅱ級組、Ⅲ級組與Ⅰ級組比較有明顯差異(34.14 vs19.00，42.29 vs 19.00)，P<0.01；Ⅱ級組與Ⅲ級組比較無明顯差異(34,14 vs 42.29)，P>0.05。輕度組、中度組及重度組患者結腸黏膜中CD83的表達強度均顯著高正常對照組(30.10 vs 16.00，33.7

11、6 vs 16.00，43.78 vs 16.00)，P<0.01；輕度組、中度組及重度組之間無明顯差異，P>0.05。 4 結腸黏膜中TLR2蛋白表達Western blot分析顯示，在大約90 kD位置出現TLR2特異性條帶。正常對照組有少量TLR2蛋白表達，Ⅰ級組、Ⅱ級組、Ⅲ級組患者結腸黏膜中TLR2蛋白含量逐漸增加；正常對照組與I級組之間無明顯差異(15.77 vs 15.94)，P>0.05；Ⅱ級組及Ⅲ級組與正常對照組

12、比較有顯著性差異(29.48 vs15.77，49.94 vs 15.77)，P<0.01；Ⅰ級組、Ⅱ級組及Ⅲ級組之間有顯著性差異，P<0.01。 與正常對照組比較，輕度組、中度組、重度組患者結腸黏膜中TLR2蛋白含量逐漸增加；正常對照組與輕度組之間無明顯差異(17,07 vs 15.77),P>0.05；中度組及重度組與正常對照組比較有顯著性差異(39.26 vs 15.77，51.98 vs 15.77)，P<0.01；輕度

13、組、中度組及重度組之間有顯著性差異，P<0.01。 5 結腸黏膜中TLR2 mRNA表達RT-PCR共擴增檢測TLR2和內參照β-actin基因表達，正常對照組及病例組在223 bp處均出現了特異性的TLR2基因條帶；在500 bp處出現了內參照β-actin的特異條帶。TLR2電泳條帶的光密度掃描顯示，正常對照組有TLR2 mRNA表達，Ⅰ級組、Ⅱ級組及Ⅲ級組患者結腸黏膜中TLR2 mRNA表達依次增加；正常對照組與Ⅰ級組之間

14、無明顯差異(16.75vs 11.38)，P>0.05；Ⅱ級組及Ⅲ級組與正常對照組比較有顯著性差異(32.61 vs 11.38，48.85 vs 11.38)，P<0.01；Ⅰ級組、Ⅱ級組及Ⅲ級組之間有顯著性差異，P<0.01。與正常對照組比較，輕度組、中度組、重度級組患者結腸黏膜中TLR2 mRNA表達呈遞增趨勢(28.93 vs 11.38，32.37vs 11.38，55.94 vs 11.38)，P<0.01；輕度組與中度組之

15、間無明顯差異(28.93 vs 32.37)，P>0.05 1輕度組及中度組與重度組之間有顯著性差異(28.93 vs 55.94，32.37 vs 55.94)，P<0.01。 6 結腸黏膜中pSTAT3蛋白表達Western blot分析顯示，在大約90 kD位置出現pSTAT3特異性條帶。正常對照組有少量pSTAT3蛋白表達，Ⅰ級組、Ⅱ級組及Ⅲ級組患者結腸黏膜中pSTAT3蛋白含量逐漸增加(17.75 vs 7.00，33

16、.61 vs 7.00，50.44 vs 7.00)，P<0.01；Ⅰ級組、Ⅱ級組、Ⅲ級組之間有顯著性差異，P<0.01。 與正常對照組相比輕度組、中度組及重度組患者結腸黏膜中pSTAIB蛋白含量呈遞增趨勢(21.70 vs 7.00，42.33 vs7.00，48.89 vs 7.00)，P<0.01；重度組與輕度組及中度組相比有顯著性差異，P<0.01;中度組與重度組之間無顯著性差異，P>0.05。 7 對pSTAT

17、3及TLR2進行Spearman相關分析：pSTAT3和TLR2之間呈正相關r=0.716，P<0.01。 結論： 與正常對照組相比UC患者結腸黏膜固有層中S-100和CD83表達上調，在一定程度上反映了臨床活動度和內鏡分級；TLR2蛋白、TLR2 mRNA及pSTAT3，在UC患者腸黏膜中表達較正常對照組增加，在一定程度上反映了臨床活動度和內鏡分級；TLR2與pSTAT3的表達呈正相關。DCs與TLR2表達異?？赡軈⑴c