恩度對(duì)人胃癌裸鼠皮下種植瘤淋巴轉(zhuǎn)移作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，是我國(guó)死亡率最高的惡性腫瘤，每年大約40萬人死于胃癌，占世界胃癌死亡人口總數(shù)的47.8％[1]。外科手術(shù)切除是胃癌的首選治療方法。但是因?yàn)榇蠖鄶?shù)患者在術(shù)前就已經(jīng)發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，使得胃癌術(shù)后患者的五年期生存率不足四成，一些無法手術(shù)切除的晚期胃癌患者的生存率則更低。所以尋找一種新的方法來抑制胃癌的淋巴轉(zhuǎn)移顯得十分重要。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康木褪菍?duì)人胃癌-SGC7901的荷瘤鼠模型的藥物干擾，研究恩度對(duì)人胃癌裸鼠皮

2、下種植瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的抑制作用。為恩度更廣泛的應(yīng)用于臨床提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)狀態(tài)良好的人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液。在裸鼠右側(cè)腋下皮下注入0.2ml，注射后局部出現(xiàn)明顯皮丘。7天后，裸鼠腋下均出現(xiàn)瘤塊，造模成功。于接種后11天將32只已經(jīng)成模的裸鼠隨機(jī)分4組(n=8):空白對(duì)照組，注射生理鹽水0.2ml，每日一次;奧沙利鉑5mg/kg，每48h一次;恩度組，3mg/kg，每日一次;恩度+奧沙利

3、鉑組，以恩度3mg/kg，每日一次和奧沙利鉑5mg/kg，每48h一次。給藥方式均為腹腔注射，連續(xù)給藥14天。每24小時(shí)觀察裸鼠的日?；顒?dòng)、飲食、排便等。每72小時(shí)稱體重一次，用游標(biāo)卡尺測(cè)量出腫塊的最長(zhǎng)徑a、最短徑b依據(jù)公式V=a×b2/(2)計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積。用藥完成后，觀察裸鼠7天，采取脫頸法處死裸鼠，取出瘤組織，稱取瘤重用于計(jì)算抑瘤率。將剝離腫瘤組織及可疑淋巴結(jié)用4％多聚甲醛固定。24h后，常規(guī)制備成石蠟切片。用免疫組化檢測(cè)VE

4、GF-C的表達(dá)。應(yīng)用podoplanin蛋白作為淋巴管標(biāo)記物，計(jì)算各組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率及微淋巴管密度。TUNEL法檢測(cè)腫瘤組織瘤細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：⑴各實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積明顯小于生理鹽水組。單獨(dú)使用恩度組與奧沙利鉑組大于恩度聯(lián)合奧沙利鉑組腫瘤體積。單獨(dú)使用恩度與奧沙利鉑組之間腫瘤體積無明顯差異。⑵腫瘤細(xì)胞凋亡率:生理鹽水組為16.38±1.48％、恩度組為28.17±2.72％、奧沙利鉑組31.45±2.79％、恩度+奧沙利鉑

5、組36.95±2.88％。各藥物干擾組凋亡率明顯高于生理鹽水組。恩度組、奧沙利鉑組、恩度+奧沙利鉑組與生理鹽水組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，奧沙利鉑組與恩度組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑶VEGF-C表達(dá)的光密度值:生理鹽水組為0.78±0.13，恩度組為0.39±0.10，奧沙利鉑組為0.79±0.15，恩度+奧沙利鉑組為0.36±0.13。恩度+奧沙利鉑組與生理鹽水組、奧沙利鉑組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。恩度組與生理鹽

6、水組、奧沙利鉑組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05）。恩度組與生理鹽水組與奧沙利鉑組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑷恩度組與恩度聯(lián)合奧沙利鉑組的淋巴轉(zhuǎn)移陽性率、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目及微淋巴管密度均明顯低于生理鹽水組與單獨(dú)應(yīng)用奧沙利鉑組;奧沙利鉑組淋巴轉(zhuǎn)移陽性率、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目及微淋巴管密度與空白對(duì)照組無明顯差異。
　　結(jié)論：①恩度與奧沙利鉑都能夠?qū)δ[瘤的生長(zhǎng)起到抑制作用，恩度與奧沙利鉑聯(lián)合應(yīng)用的效果明顯好于兩種藥物的單獨(dú)應(yīng)用。②恩度能夠?qū)δ[瘤的微