VEGF-B基因靶向siRNA對(duì)肝癌細(xì)胞裸鼠皮下種植瘤VEGF-B蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名：相親l氫導(dǎo)師簽章：二級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：、1●沙J弓篾。多月矽日、?！凇?、：氣：

2、、j“≈i：，河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)：文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：囪麥遢導(dǎo)師簽章／彳多勿緲伽J弓華弓月多衫日中文摘要VEGFB基因靶向siRNA對(duì)肝癌細(xì)胞裸鼠皮下種植瘤VEGF—B蛋白表達(dá)的影響摘要目的：原發(fā)性肝癌(以下簡(jiǎn)稱肝癌)為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病隱匿，進(jìn)展速度快，預(yù)后差。目前對(duì)于肝癌的治療主要是以手術(shù)為主的綜合治療，包括：手術(shù)切除、射頻消融、微波固化、化療栓塞(TACE

3、)、放射治療、生物免疫治療等，手術(shù)切除為目前最主要、最有效的方法，但患者術(shù)后5年生存率低，主要是因?yàn)榛颊咝g(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的形成，血管的新生是一個(gè)多因素調(diào)節(jié)的過(guò)程，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是促進(jìn)血管形成的重要調(diào)節(jié)因子之一，VEGF除具有促進(jìn)血管形成作用外，還具有促進(jìn)淋巴管形成、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、保護(hù)及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)等作用，并且與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)VEGF家族共有7個(gè)成員，VEGFB為其中重要的

4、一員，我們前期的研究發(fā)現(xiàn)肝癌的發(fā)生、發(fā)展與VEGFB密切相關(guān)。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)為轉(zhuǎn)錄后的基因沉默，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因的高特異、高效沉默，小干擾RNA(siRNA)是RNA干擾中主要介導(dǎo)因子。本實(shí)驗(yàn)從人類VEGFB基因中選取3個(gè)靶點(diǎn)，利用RNA干擾技術(shù)體外構(gòu)建3個(gè)VEGFB基因靶向siRNA，轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞并建立裸鼠皮下種植瘤模型，觀察抑制VEGFB基因后對(duì)肝癌細(xì)胞裸鼠皮下種植瘤的影響，

5、從而為肝癌的基因治療提供新的靶點(diǎn)及理論依據(jù)。方法：從人VEGF—B基因中選取3個(gè)靶點(diǎn)，利用RNA干擾技術(shù)體外構(gòu)建3個(gè)靶向siRNA。常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞，借助質(zhì)粒載體將陰性空白對(duì)照質(zhì)粒及3個(gè)陽(yáng)性VEGF—B基因靶向siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞(轉(zhuǎn)染后分別命名為：Bt0，Btl，Bt2，Bt3)，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后觀察轉(zhuǎn)染效率，用blasticidin穩(wěn)定篩選并培養(yǎng)擴(kuò)增。將24只裸鼠隨機(jī)分成4組，并將轉(zhuǎn)染篩選后的4組細(xì)胞種植