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文檔簡介
1、目的:探討ID-1特異的RNAi對人肝癌HepG2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,以及其對移植瘤中ID-1及p-ERK基因表達的影響。探討ID-1與ERK1/2信號通路在裸鼠皮下種植瘤增殖中的作用。
方法:在BALB/C-nu系雄性裸鼠右腋皮下注射HepG2細胞5×106/0.2ml建立荷人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型15只。待腫瘤直徑約8mm時,把其隨機分為3組,空白組、陰性對照組、陽性組,每組5只。陽性組在后1天、4天、7天
2、、11天、15天分別注射甲基化的siRNA-ID-14nmol/100ul,對照組注射CONTROL-siRNA4nmol/100ul,空白對照組注射生理鹽水100ul。期間每周測量腫瘤體積,制作腫瘤生長曲線。28天后處死裸鼠,制作腫瘤組織標本,進行常規(guī)病理學檢查,半定量RT-PCR檢測ID-1、p-ERK1/2mRNA的表達情況,通過免疫組織化學來檢測ID-1、p-ERK1/2的蛋白表達。
結(jié)果:裸鼠成瘤率100%,5天
3、后在皮下摸到小結(jié)節(jié)。注射甲基化Si-ID-1一周后陽性組的裸鼠腫瘤生長速度明顯減慢,瘤體增大不明顯,陰性對照組和空白組腫瘤體積繼續(xù)生長,體積每周都有增大。病理組織學顯示:肉眼觀察,陽性組的裸鼠腫瘤體積明顯較陰性對照組和空白對照組??;顯微鏡下觀察,實驗組的腫瘤細胞呈片狀變性壞死,多數(shù)細胞核完全溶解,細胞結(jié)構(gòu)消失,壞死的腫瘤組織呈現(xiàn)均質(zhì)、紅染表現(xiàn),周圍腫瘤細胞與對照組相比殘留較少,空白對照組及陰性對照組HE染色見瘤細胞排列密集,細胞界限不清
4、,生長活躍,核大深染,有較多核分裂象。RT-PCR顯示si-ID-1組ID-1、p-ERK1/2mRNA表達明顯降低,與陰性對照組和空白組比較,差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。免疫組化顯示實驗組的ID-1、p-ERK1/2陽性反應(yīng)率較空白對照組及陰性對照組明顯減少,差別具有統(tǒng)計學意義。
結(jié)論:人肝癌細胞HepG2移植瘤中ID-1、p-ERK1/2均高表達,應(yīng)用甲基化的siRNA靶向抑制ID-1基因可以顯著抑制裸鼠皮下移
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