氧化苦參堿對(duì)人胃癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤抑制作用的研究.pdf

1、目的 本研究旨在通過觀察氧化苦參堿(oxymatrine，OXY)對(duì)人胃癌MGC-803細(xì)胞系裸鼠移植瘤的抑制作用，考察氧化苦參堿對(duì)MGC-803細(xì)胞系裸鼠移植瘤的抑瘤率，觀察氧化苦參堿對(duì)該移植瘤病理形態(tài)學(xué)影響以及該移植瘤周期蛋白表達(dá)情況的變化，初步分析其抗腫瘤機(jī)理，為氧化苦參堿抗胃癌作用提供體內(nèi)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為氧化苦參堿用于胃癌的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。 方法 1 體外培養(yǎng)MGC-803細(xì)胞，采用皮下移植法接種

2、于BALB/cA-nu裸鼠皮下造成裸鼠皮下荷瘤模型。 2 選取體積達(dá)到100～300mm<'3>的裸小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分為陰性對(duì)照組(生理鹽水，NS)、陽性對(duì)照組(5-FU)、氧化苦參堿小劑量組(OXY小，64mg/kg)、氧化苦參堿中劑量組(OXY中，128mg/kg)、氧化苦參堿大劑量組(OXY大，256mg/kg)5組，每組不少于6只。腹腔注射給藥，觀察荷瘤鼠腫瘤生長情況，繪制腫瘤生長體積變化曲線，計(jì)算腫瘤相對(duì)抑制率IR(％)

3、，分析氧化苦參堿對(duì)MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤增殖活性的影響。 3應(yīng)用HE染色光學(xué)顯微鏡觀察和透射電鏡技術(shù)，觀察氧化苦參堿作用于MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤后，腫瘤的形態(tài)學(xué)改變。 4 應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)，對(duì)細(xì)胞周期，以及細(xì)胞內(nèi)增殖相關(guān)蛋白(CyclinDl和CDK4)表達(dá)水平進(jìn)行分析，探討氧化苦參堿對(duì)人胃癌裸鼠皮下移植瘤增殖抑制的作用機(jī)制以及與基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)系。 結(jié)果 1 觀察腫瘤生長情況，計(jì)算腫

4、瘤體積變化顯示，氧化苦參堿具有抑制MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤生長的作用，與陰性對(duì)照組比較不同劑量的氧化苦參堿以及陽性對(duì)照藥均可延緩腫瘤的生長，各用藥組腫瘤平均體積明顯小于陰性對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；氧化苦參堿小、中、大劑量組以及陽性對(duì)照組平均抑制率分別為：10.2％、36.50％、43.20％、45.43％。 2 比較各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物體重可以看出，陽性對(duì)照組(5-FU)與陰性對(duì)照組、氧化苦參堿小、中、大劑量

5、組相比，平均體重下降幅度最大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； 3 光學(xué)顯微鏡觀察各用藥組腫瘤發(fā)生不同程度的壞死，透射電鏡觀察顯示超微結(jié)構(gòu)可見細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞，胞漿外溢，部分出現(xiàn)裸核等細(xì)胞壞死的形態(tài)學(xué)改變。 4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，以及細(xì)胞增殖相關(guān)基因蛋白表達(dá)結(jié)果顯示：1)與陰性對(duì)照組比較，氧化苦參堿中、大劑量組，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞明顯增多，S期細(xì)胞明顯減少，與其它各組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

6、：2)PI值(增殖指數(shù))分別為0.30±0.07，0.22±0.14，低于陰性對(duì)照組PI值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3)與陰性對(duì)照組比較，中劑量氧化苦參堿組細(xì)胞內(nèi)CyclinD1和CDK4低表達(dá)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 1 氧化苦參堿對(duì)MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤有顯著抑制作用，期作與用藥劑量有關(guān)，其中大劑量氧化苦參堿療效最佳。 2 氧化苦參堿對(duì)MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤抑制

7、作用，主要表現(xiàn)在抑制腫瘤細(xì)胞增殖引起腫瘤壞死兩個(gè)方面。 3 氧化苦參堿對(duì)MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤抑制作用的機(jī)制主要是將腫瘤細(xì)胞的周期阻滯阻滯在G<,0>/G<,1>期，同時(shí)引起腫瘤壞死，引起腫瘤壞死的機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。 4 氧化苦參堿對(duì)MGC-803細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤周期阻滯的作用機(jī)制是通過下調(diào)CyclinD1和CDK4從而干擾細(xì)胞G<,1>期到S期的轉(zhuǎn)換過程，最終使細(xì)胞停止增殖(進(jìn)入G<,0>狀態(tài))而實(shí)現(xiàn)的