華貴櫛孔扇貝視黃醇代謝基因克隆及其表達(dá)的初步研究.pdf

1、視黃醇代謝系統(tǒng)對(duì)維持動(dòng)物體內(nèi)視黃醇的平衡以及其它相關(guān)生理功能有重要作用，其以?胡蘿卜素為主要底物，經(jīng)過(guò)一系列的酶反應(yīng)，生成了視黃醇、視黃酯等諸多相關(guān)代謝產(chǎn)物。該體系在脊椎動(dòng)物中有較深入的研究，但在無(wú)脊椎動(dòng)物如軟體動(dòng)物中，相關(guān)的研究還很匱乏，并且不系統(tǒng)。本研究以類胡蘿卜素含量差異明顯的華貴櫛孔扇貝的兩個(gè)品系，橙色品系，亦”南澳金貝”和褐色品系為對(duì)象，克隆了視黃醇代謝系統(tǒng)的關(guān)鍵基因乙醇脫氫酶(ADH)和二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)，并對(duì)兩

2、個(gè)基因序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;同時(shí)研究了ADH，DGAT，以及本實(shí)驗(yàn)室已獲得的視黃醇代謝系統(tǒng)的關(guān)鍵基因β胡蘿卜素加氧酶1(BCMO1)，β胡蘿卜素加氧酶2(BCMO2)，這四條基因在兩品系各組織中的表達(dá)情況，探究了其與扇貝類胡蘿卜素含量的關(guān)系。
　　(1)克隆獲得華貴櫛孔扇貝ADH基因，命名為cnADH，其中cnADH全長(zhǎng)1365 bp，5’非翻譯區(qū)長(zhǎng)度為70 bp，3’非翻譯區(qū)為83 bp。cnADH包含一個(gè)1212 bp的開(kāi)

3、放閱讀框(ORF)，編碼一個(gè)含有404個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)多肽。經(jīng)過(guò)多序列BLAST對(duì)比鑒定，該基因?qū)儆贏DH3類型，亦無(wú)脊椎動(dòng)物中最常見(jiàn)的類型。
　　(2)克隆獲得華貴櫛孔扇貝 DGAT基因，命名為cnDGAT，其中cnDGAT全長(zhǎng)1611 bp，5’非翻譯區(qū)長(zhǎng)度為61 bp，3’非翻譯區(qū)為161 bp。cnDGAT包含一個(gè)1389 bp的開(kāi)放閱讀框(ORF)，編碼一個(gè)含有463個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)多肽。經(jīng)過(guò)多序列BLAST對(duì)比

4、鑒定，該基因?qū)儆贒GAT1類型。
　　(3) ADH，DGAT，BCMO1,BCMO2在兩品系各組織中都有著普遍的表達(dá),在外套膜中的表達(dá)量顯著高于其它組織,而且 ADH,DGAT在褐色品系中的表達(dá)量稍高于橙色品系,特別是在閉殼肌中。BCMO2在褐色品系血液中的表達(dá)量高于 BCMO1,其它組織中兩基因無(wú)明顯差異。
　　本研究首次在扇貝中克隆獲得了ADH和DGAT基因的全長(zhǎng)，并研究了視黃醇代謝系統(tǒng)中關(guān)鍵的ADH，DGAT，BCM