華貴櫛孔扇貝卵黃蛋白原基因克隆表達(dá)及其免疫功能的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、華貴櫛孔扇貝(Chlamysnobilis)以其貝殼具有橙色、橙紫色、紫色、褐色等多種絢麗的色彩而聞名。因其營養(yǎng)豐富、味道鮮美、生長快、養(yǎng)殖周期短、經(jīng)濟(jì)效益高,自上世紀(jì)70年代就已經(jīng)成為我國南方重要的海水養(yǎng)殖貝類。
  卵黃蛋白原(Vitellogenin,Vg)作為卵黃蛋白(Yolkprotein,Vn)的前體,廣泛存在于卵生非哺乳類性成熟動物中,在卵子和胚胎的發(fā)育過程中具有重要的作用,不僅能為發(fā)育中的動物胚胎提供氨基酸、脂肪、

2、碳水化合物等營養(yǎng)物質(zhì),還能轉(zhuǎn)運(yùn)類胡蘿卜素、維生素等功能性物質(zhì),此外,還在生物體內(nèi)參與免疫防御過程,具有免疫功能。
  本文以華貴櫛孔扇貝橙色和褐色個體為材料,首次克隆了Vg基因的全長cDNA,并進(jìn)行了同源性分析、時空表達(dá)分析及其與類胡蘿卜素含量、總抗氧化能力的關(guān)系的研究,初步分析Vg基因免疫相關(guān)功能及其作用機(jī)理。主要結(jié)果如下:
  1、Vg基因全長cDNA序列的克隆。采用同源克隆結(jié)合RACE-PCR的方法,首次克隆得到華貴櫛

3、孔扇Vg基因的全長cDNA序列,全長7760bp,共編碼2289個氨基酸殘基。取21個物種做同源分析發(fā)現(xiàn),櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)和蝦夷扇貝(Mizuhopectenyessoensis)顯示出更近的親緣關(guān)系,先匯成一支后與華貴櫛孔扇貝匯聚,之后依次與其它海洋貝類、昆蟲、蝦、蟹等節(jié)肢動物聚類,最后與脊椎動物類聚。
  2、VgmRNA時空表達(dá)分布。采用熒光定量PCR技術(shù)檢測VgmRNA在不同組織不同發(fā)育時期的表達(dá)水

4、平變化,結(jié)果顯示,VgmRNA具有組織表達(dá)特異性和性腺發(fā)育水平相關(guān)性。VgmRNA在卵巢中大量表達(dá),在精巢及其他組織中只有痕量表達(dá);VgmRNA在生長期表達(dá)水平較高,在成熟期顯著下降,在排卵后期又恢復(fù)到較高水平。
  3、Vg與類胡蘿卜素含量、總抗氧化能力的關(guān)系。通過對卵巢VgmRNA表達(dá)水平、類胡蘿卜素含量及總抗氧化能力的測定,發(fā)現(xiàn)VgmRNA表達(dá)水平與類胡蘿卜素含量,VgmRNA表達(dá)水平與總抗氧化能力、類胡蘿卜素含量與總抗氧化

5、能力之間存在顯著的(P<0.05)正相關(guān)性。
  4、VgmRNA在感染實(shí)驗(yàn)中的變化。在雌性個體的性腺中注射17β-雌二醇,通過熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)其可以誘導(dǎo)VgmRNA的表達(dá),證明17β-雌二醇可以促進(jìn)華貴櫛孔扇貝Vg的合成。通過對華貴櫛孔扇貝進(jìn)行鰻弧菌感染實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)Vg在鰻弧菌感染24h內(nèi)出現(xiàn)先上升后下降的趨勢,表明Vg對華貴櫛孔扇貝應(yīng)對細(xì)菌感染有一定相關(guān)性,可能起到免疫防御的功能。由于類胡蘿卜素可以通過干擾代謝或基因互作在

6、基因的表達(dá)和調(diào)節(jié),我們推測類胡蘿卜素在Vg行使免疫防御功能的時候起著重要作用。
  本研究首次獲得華貴櫛孔扇貝Vg基因全長cDNA序列,同時研究了VgmRNA空間表達(dá)特性,為今后開展Vg基因表達(dá)與調(diào)控的研究提供了理論依據(jù);本研究首次將VgmRNA表達(dá)水平和類胡蘿卜素含量及總抗氧化性聯(lián)系起來,給Vg免疫功能的研究提供了新角度;Vg作為一種具有免疫活性的分子,在軟體動物的非特異性免疫中能夠發(fā)揮作用,這也為探索貝類新的免疫途徑,改善貝類

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