低劑量雙酚A生殖毒性敏感窗口的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、環(huán)境雌激素是現(xiàn)代生命科學領(lǐng)域研究的熱點之一,越來越多的人開始關(guān)注這一話題。雙酚A(BPA)化學結(jié)構(gòu)與雌激素類似,是已經(jīng)證實的一種環(huán)境雌激素活性物質(zhì),屬于內(nèi)分泌干擾物的范疇。雙酚A主要用于塑料的聚碳酸酯、環(huán)氧樹脂制造以及其他塑料聚合物添加劑的制造,其廣泛的應(yīng)用范圍導致人類無時無刻都在接觸BPA。國內(nèi)外研究表明BPA能夠干擾多種生物的內(nèi)分泌功能,影響野生生物生存安全,甚至威脅人類生命健康,在哺乳動物中的研究主要集中在BPA對動物生殖功能和性

2、腺發(fā)育的影響,低劑量BPA的毒理學研究在水生動物中的研究報道相對較少。因此本文以斑馬魚為模式生物,建立環(huán)境相關(guān)濃度的BPA暴露模型,研究環(huán)境雌激素BPA對斑馬魚生殖發(fā)育的毒性作用,為明確BPA生殖毒性提供科學依據(jù)及為其毒性機理的進一步研究奠定基礎(chǔ)。
  本團隊之前相關(guān)研究表明,1 nmol/L BPA對斑馬魚染毒有明顯毒性作用;依照斑馬魚的孵化狀況、性腺分化特點劃分出四個不同的暴毒窗口期。選用胚胎期(0-72hpf,hour po

3、st fertilization)、幼體期(3-20dpf,day post fertilization)、性分化期(21-42dpf, day postfertilization)、生長和繁殖期(43dpf-實驗結(jié)束)四個暴毒窗口對斑馬魚進行低劑量BPA(1nmol/L)的水體暴毒。對不同窗口靜水暴毒后,將全程檢測各指標直至繁殖出子一代,檢測指標主要圍繞雌雄個體的性腺發(fā)育和生殖功能,并包括反映大腦發(fā)育的行為實驗。幼體階段檢測指標包含胚

4、胎期和幼體期暴毒的兩個窗口仔魚的光照活力、光暗刺激行為實驗;成魚階段檢測內(nèi)容為120dpf成魚的體長、體重及生長因子,150dpf成魚的性別比例、成魚行為實驗(光暗刺激反應(yīng)實驗、鏡面攻擊實驗)、精巢重量、精子密度、精子總活力、活躍精子活力、精子運動速度、產(chǎn)卵能力及性腺石蠟切片;收集子一代胚胎,統(tǒng)計子一代受精率,48hpf、60hpf、72hpf的孵化率,120hpf、7dpf畸形率,24hpf、72hpf、8dpf的死亡率及120hpf

5、的行為實驗。
  研究結(jié)果表明,BPA水體暴毒對運動行為的影響:胚胎期處理組中,120hpf仔魚、150dpf成魚及子一代仔魚的自由游動速度較對照組有上升趨勢,且在親代中有顯著性升高;幼體期暴毒組中,親代仔魚、成魚及子一代仔魚的自由游動速度較對照組有下降趨勢,且在親代成魚及子代仔魚中有明顯降低;性分化期和成魚期暴毒組中,成魚及子代仔魚的泳速無明顯變化。說明BPA對發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生了持久性毒性作用,能有效改變斑馬魚的運動行為,且

6、這種促進或抑制作用會延續(xù)到子一代;同時也證實了形成中的神經(jīng)系統(tǒng)更加敏感。BPA水體暴毒對親代生殖發(fā)育的影響:除性分化期外其他處理組120dpf成魚的體長、體重整體呈上升趨勢;生長因子——豐滿度總體上也呈增加趨勢,其中在幼體期處理組中雄魚影響最顯著。說明幼體期暴毒窗口對BPA反應(yīng)較為敏感,BPA可增加體重,可能促使了肥胖癥的發(fā)生。BPA有雌激素效應(yīng),可促使斑馬魚向雌性方向分化,幼體期暴毒組性別比例差異顯著;各處理組中精巢重量、精子密度沒有

7、發(fā)生顯著變化,但精子總活力、活躍精子活力都明顯減弱了,在幼體期和成魚期暴毒組精子游動速度發(fā)生了顯著性降低;各處理組精巢進行HE染色分析,在其結(jié)構(gòu)上并沒有觀察到明顯病變。BPA水體暴毒對子代胚胎發(fā)育的影響:各處理組產(chǎn)卵量有下降的趨勢,但不具有統(tǒng)計學差異;在孵化率、畸形率及死亡率方面都沒有發(fā)生顯著性變化,可能原因是BPA水體暴毒劑量低,處理時間較短其毒性不能在子一代胚胎上表現(xiàn)出來。
  由此可見,本實驗可初步得出幼體期窗口暴毒對BPA

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