雙酚A對男性生殖功能的影響及機制探討.pdf

1、環(huán)境雌激素雙酚A（BisphenolA，BPA）是一種重要的化工原料，其廣泛的應用范圍導致了無處不在的暴露。BPA具有弱雌激素樣作用和強抗雄激素樣作用，可對雄性生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響。然而關于BPA雄性生殖毒性的人群研究和相關機制研究的報道極為有限。本研究通過人群研究探討B(tài)PA對男性的生殖毒性，通過動物實驗研究進一步探索可能的機制，為明確BPA的雄性生殖毒性及其機理提供科學依據(jù)。
　　目的
　　采用人群研究和動物實驗研究相結合的方

2、法，探討B(tài)PA暴露對男性生殖功能的影響，并進一步探索可能的機制，為BPA對生殖功能的作用及其機制的研究提供新的思路。
　　1．通過分析BPA對男性精子質量、血清性激素水平以及性功能之間的關系，探討B(tài)PA對男性的生殖毒性；
　　2．探討B(tài)PA對雄性大鼠生殖系統(tǒng)及精子質量的影響，以及對主要激素睪酮（T）與卵泡刺激素（FSH）的影響；
　　3．通過研究BPA對激素受體AR、FSHR和信號通路相關基因Src、ERK1/2、CR

3、EB的影響，初步探討B(tài)PA在精子發(fā)生過程中可能的分子機制。
　　方法
　　人群研究：收集543名研究對象，采用結構式問卷調(diào)查研究對象一般人口學特征、既往病史及用藥史、生活方式、性生活史、BPA暴露史等。采集研究對象尿液、精液、血液，應用高效液相色譜法(HPLC)檢測尿液中BPA水平；計算機輔助精子分析系統(tǒng)檢測精子數(shù)量、活動力和存活率，改良巴氏染色法檢測精子形態(tài)學；放射免疫法(RIA)檢測血清卵泡刺激素（FSH）、泌乳素（PR

4、L）、睪酮（T）、雌二醇（E2）水平，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清抑制素B(INB)、游離睪酮（FT）、性激素結合球蛋白（SHBG）和雄烯二酮（AD）水平。應用SPSS16.0軟件建立數(shù)據(jù)庫并運用t檢驗、χ2檢驗、趨勢χ2檢驗、pearson相關分析、spearman秩相關分析、多元線性回歸分析等檢驗方法進行統(tǒng)計分析。
　　動物實驗：雄性Wistar大鼠（200±20g）28只按體重隨機分為4組，每天固定時間灌胃染毒，染毒

5、劑量分別為BPA0、50、100、200mg/（kg.d），連續(xù)4周后處死大鼠，采集生殖系統(tǒng)臟器、血清及一側附睪尾精子。計算機輔助分析檢測大鼠精子密度、活力、存活率，改良巴氏染色法檢測精子畸形率；放射免疫法檢測血清T、FSH水平。采用Real-timePCR和Western-blot法分別檢測大鼠睪丸中AR、FSHR、Src、ERK1/2、CREB基因mRNA和蛋白表達水平。采用SPSS16.0建立數(shù)據(jù)庫并運用單因素方差分析、Dunne

6、t-t檢驗進行統(tǒng)計分析。
　　結果
　　人群研究
　　1．尿液中BPA濃度升高與精子密度低下、精子總數(shù)低下、精子活動力低下、精子存活率低下之間存在劑量效應關系；在調(diào)整可疑混雜因素后，尿液中BPA濃度與精子密度、總數(shù)、活動力、存活率之間存在負相關關系。
　　2．尿液BPA濃度升高與FT,AD,SHBG,PRL,FSH水平異常之間存在劑量效應關系。在調(diào)整可疑混雜因素后，尿液BPA濃度與AD、FSH水平之間存在負相關關

7、系，與SHBG、PRL、E2水平之間存在正相關關系。
　　3．尿液中BPA濃度升高與男性性欲沖動程度、受刺激勃起能力、完成性交能力、射精強度、性生活滿意度降低，以及勃起困難程度和射精困難程度升高之間存在劑量效應關系；在調(diào)整可疑混雜因素后，尿液中BPA濃度與各表現(xiàn)指標之間存在相關關系。
　　動物實驗
　　1．各染毒組體重增長量和染毒后體重之間存在差異，高劑量組體重增長量顯著低于對照組；各染毒組大鼠精囊、前列腺、睪丸、附睪

8、等性腺器官的臟器系數(shù)存在顯著性差異，與對照組相比，中、高劑量組睪丸、精囊腺、前列腺臟器系數(shù)明顯降低，高劑量組附睪臟器系數(shù)也明顯降低。
　　2．各染毒組間精子質量存在顯著性差異；與對照組相比，中、高劑量組精子活力和存活率顯著降低；高劑量組精子密度也顯著降低。
　　3．各染毒組間性激素T和FSH水平存在顯著性差異；與對照組相比BPA中、高劑量組血清T水平明顯降低，而高劑量組FSH水平明顯升高；各染毒組間AR、FSHRmRNA和蛋

9、白表達平均存在顯著性差異；BPA中、高劑量組大鼠睪丸組織中AR、FSHRmRNA和蛋白水平均顯著低于對照組。
　　4．未發(fā)現(xiàn)各染毒組間SrcmRNA和蛋白以及蛋白磷酸化表達之間存在顯著性差異；未發(fā)現(xiàn)各染毒組間ERK1/2mRNA和蛋白表達之間存在顯著性差異,但ERK1/2蛋白磷酸化表達存在顯著性差異，BPA中、高劑量組ERK1/2蛋白磷酸化水平顯著低于對照組；未發(fā)現(xiàn)各染毒組間CREBmRNA和蛋白表達之間存在顯著性差異,但CREB

10、蛋白磷酸化表達存在顯著性差異，BPA高劑量組CREB蛋白磷酸化水平顯著低于對照組。
　　結論
　　1．尿液BPA水平升高與男性精子質量下降、性激素水平異常、性功能下降相關；
　　2．高劑量BPA染毒對雄性Wistar大鼠有明顯的生殖毒性，導致性腺器官受損，精子質量下降、激素水平改變；
　　3．BPA可導致大鼠睪丸組織中ERK1/2、CREB蛋白磷酸化水平降低，提示BPA可能通過對ERK1/2、CREB通路的抑制而