食管癌患者樹(shù)突狀細(xì)胞免疫功能的研究.pdf

1、第一部分食管癌患者和健康人外周血中 DCs的免疫表型檢測(cè)
　　背景和目的：DCs作為一種專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞,具有獨(dú)特的免疫學(xué)功能,而該功能取決于 DCs的免疫狀態(tài),尤其是其成熟分化的程度及主要組織相容性抗原復(fù)合物-Ⅱ(MHC-Ⅱ)和分子 B7分子等免疫分子的表達(dá)狀況。一般認(rèn)為腫瘤相關(guān)抗原(TAA)只有在MHC-Ⅱ的限制下才又可能激活 T1淋巴細(xì)胞,從而啟動(dòng)宿主免疫系統(tǒng),產(chǎn)生特異抗腫瘤免疫反應(yīng)。而這一過(guò)程必須在 B7等第二信號(hào)分子的輔

2、助下才能順利完成。DCs表面 MHC-Ⅱ及 B7分子表達(dá)低下或缺失將導(dǎo)致 DCs免疫功能低下或免疫無(wú)能。我們擬通過(guò)分離食管癌患者和正常人外周血中單個(gè)核細(xì)胞(PBMNC),在GM-CSF和IL-4細(xì)胞因子的刺激下,培養(yǎng)7天收集DCs并檢測(cè)其表面CD83、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)等分子的表達(dá)。
　　材料和方法：食管癌患者及與之匹配健康人各5例,各取外周靜脈血20ml,采用 Thomas法,分離及培養(yǎng) DCs。培養(yǎng)過(guò)程

3、中,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。培養(yǎng)7天后,收集DCs,透射電鏡觀察DCs形態(tài),采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCs表面CD83、CD80、CD86等分子的表達(dá)。用液閃計(jì)數(shù)儀觀察DCs對(duì)T細(xì)胞的增殖作用。
　　結(jié)果：在細(xì)胞因子的刺激下,培養(yǎng)7天后通過(guò)倒置相差顯微鏡和透射電鏡可以見(jiàn)到典型的 DCs形態(tài)。與正常對(duì)照組相比,由食管癌患者外周血培養(yǎng)而來(lái)的 DCs表達(dá)較低的 CD80(41.76±7.35 VS61.41±7.47,P<0.05)和

4、CD86(29.68±7.32 VS37.28±6.75,P<0.05),但是反映 DCs成熟狀態(tài)的 CD83分子在兩組中沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(4.44±1.17 VS5.18±1.59,P>0.05);其誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖能力每分鐘液閃計(jì)數(shù) cpm為10000±2000,明顯低于正常人組( cpm為30000±3000),P<0.01。
　　結(jié)論：1.本研究發(fā)現(xiàn),在細(xì)胞因子 GM-CSF和 IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)下,食管癌患者外周血DCs表面C

5、D80、CD86分子的表達(dá)水平明顯低于正常人水平,其刺激 T細(xì)胞增殖能力亦低于正常人。2.無(wú)論是食管癌患者,還是正常人,經(jīng)GM-CSF和IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)后,都極少表達(dá)反映成熟、有活性DCs標(biāo)記物CD83,表明通過(guò)此法獲得的是處于未成熟狀態(tài)的DCs。
　　組織標(biāo)本 CD83,CD80,CD86及 S-100表達(dá)的檢測(cè)
　　背景和目的：在參與T細(xì)胞激活的諸多協(xié)同刺激分子中,最重要的是T細(xì)胞表面CD28分子與APC表面相應(yīng)配體CD

6、80(B7-1)和CD86(B7-2)的結(jié)合。CD28/B7分子之間的相互作用,可提高T細(xì)胞對(duì)抗原刺激的敏感性,穩(wěn)定細(xì)胞間接觸,從而提供T細(xì)胞激活所必不可少的協(xié)同刺激信號(hào)。若缺乏CD80和CD86的表達(dá),T細(xì)胞被誘導(dǎo)呈不應(yīng)答狀態(tài),此時(shí)腫瘤細(xì)胞是沒(méi)有免疫原性的。作為DCs的標(biāo)記,臨床組織切片多以S-100確認(rèn)DCs。另外,新近證明CD83是成熟的有活性的DCs的最具特異性標(biāo)記物。
　　材料和方法：所有標(biāo)本均來(lái)自汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬

7、醫(yī)院2001年至2002年外科手術(shù)切除標(biāo)本,共30例,經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實(shí)為食管癌,病理類(lèi)型均為鱗狀細(xì)胞癌,所有標(biāo)本含有癌旁組織,取距癌組織邊緣8cm以外的組織標(biāo)本作為正常對(duì)照組織(經(jīng)HE染色證實(shí)無(wú)癌細(xì)胞浸潤(rùn))。標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定、脫水、常規(guī)石蠟包埋,制備成5mm厚連續(xù)切片備用。鼠抗人CD80、CD86、CD83抗原IgG單克隆抗體均為美國(guó)Pharmingen公司產(chǎn)品;S-100多克隆抗體、SP與SAP免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中山

8、試劑公司;New Fuchsin顯色劑購(gòu)自美國(guó)Labvision公司。
　　結(jié)果：1.與正常食管粘膜組織相比,食管癌組織表達(dá)更少的CD80(24.37±4.87 VS46.25±14.04, P<0.01)、CD86(20.37±4.89 VS26.87±5.89, P<0.05)及S-100(56.32±6.25 VS72.45±12.34, P<0.01)。2. CD83分子的表達(dá)在癌旁組織中明顯增多(7.82±6.69 VS