添加篩選的中藥培養(yǎng)液對小鼠體外受精及胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、中藥是我國特有的資源，中藥中的有效成分在動物繁殖中治療不孕癥、流產(chǎn)、保胎及促進精子活力等方面作用突出，還具有抗過氧化效應(yīng)、清除自由基、促進卵母細胞成熟和細胞增殖等作用。共培養(yǎng)是近10多年來在胚胎培養(yǎng)方面最引人注目的變革之一。共培養(yǎng)能改善胚胎的形態(tài)、促進卵裂并有較高的細胞數(shù)、提高囊胚的形成率及孵化率。目前，胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)的累積效率還很低，卵母細胞的存活力與異常卵母細胞的產(chǎn)生也是制約胚胎體外生產(chǎn)的瓶頸之一。本研究旨在探討一種穩(wěn)定的適合小鼠

2、子宮內(nèi)膜上皮細胞培養(yǎng)的方法，篩選能促進體外受精及胚胎體外發(fā)育的中藥添加劑，并探討其合適的添加時間，從而構(gòu)建一種理想的培養(yǎng)體系，以提高胚胎體外生產(chǎn)的累積效率。 本試驗為了研究適宜的中藥培養(yǎng)液對小鼠體外受精及胚胎發(fā)育的影響，進行了三個階段試驗研究：第一階段是篩選了適合于小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞的培養(yǎng)方法，獲得了高純度子宮內(nèi)膜上皮細胞；第二階段在小鼠胚胎不同培養(yǎng)階段在培養(yǎng)液中分別加入三種中藥添加劑，觀察其對體外受精及胚胎體外發(fā)育的影響，篩

3、選適宜的中藥培養(yǎng)液并確定其合適的添加時間；第三階段結(jié)合前兩項試驗結(jié)果，構(gòu)建新的共培養(yǎng)體系，觀察小鼠體外受精胚胎體外發(fā)育的效果。試驗結(jié)果表明： (1)采用酶消化法可以獲得小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞，但酶會影響細胞活力，致使細胞增殖緩慢，且酶消化法獲得的上皮細胞純度不高；采用子宮翻轉(zhuǎn)組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞，細胞活力高，增殖速度快，可以獲得較好的原代培養(yǎng)效果。該方法為下一步研究胚胎共培養(yǎng)提供了可靠的體細胞來源。 (2)