不同培養(yǎng)液成分及培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)水牛體外受精早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、本試驗(yàn)研究的主要內(nèi)容是探討不同的添加物及培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)水牛早期胚胎體外發(fā)育的影響，通過(guò)這些影響胚胎體外發(fā)育的重要因素的研究，確定合適的添加濃度，為不斷改善牛早期胚胎培養(yǎng)液組分及培養(yǎng)系統(tǒng)提供科學(xué)的依據(jù)。抽取來(lái)自屠宰場(chǎng)水牛卵巢表面直徑為2～6mm卯泡的卵母細(xì)胞，在體外成熟培養(yǎng)后與水牛精子進(jìn)行體外受精(IVF)，受精后18 h將假定受精的卵子移入添加有不同成分的培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)，受精后2 d檢查分裂率，5～9 d檢查囊胚發(fā)育率；所得囊胚分別進(jìn)行冷

2、凍，觀察其解凍后囊胚的孵化能力；用Hoechst33342進(jìn)行染色，檢查其細(xì)胞數(shù)；進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，進(jìn)行胚胎蛋白質(zhì)組分差異分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1)在TCM-199培養(yǎng)液中添加的胰島素濃度為5μg／mL時(shí)，水牛早期胚胎的囊胚發(fā)育率，囊胚細(xì)胞數(shù)及冷凍-解凍后胚胎的孵化率都顯著高于對(duì)照組及其他濃度組(P<0.05)；2)不管在受精后18 h還是96 h在TCM-99培養(yǎng)液中加入葡萄糖，當(dāng)濃度大于6 mM時(shí)顯著影響水牛早期

3、胚胎發(fā)育到囊胚及孵化囊胚的階段(P<0.05)；3)在TCM-199培養(yǎng)液中聯(lián)合添加胰島素和葡萄糖時(shí)能顯著提高水牛早期胚胎的孵化囊胚率、總囊胚率和囊胚細(xì)胞數(shù)(P0.0