Human iPS培養(yǎng)液對延邊黃牛體外受精卵發(fā)育的影響.pdf

1、為加強(qiáng)延邊黃牛品種保存，保持物種的多樣性和保護(hù)生態(tài)平衡，為延邊黃牛品種資源開發(fā)和永續(xù)利用，本研究圍繞如何提高延邊黃牛體外生產(chǎn)胚胎移植妊娠率的關(guān)鍵點(diǎn)，從體外受精胚胎各階段的培養(yǎng)方法，操作技術(shù)及移植囊胚質(zhì)量等環(huán)節(jié)展開了深入研究，結(jié)果如下：
　　1.本試驗(yàn)對延邊黃牛體外胚胎生產(chǎn)體系中，如何提高妊娠率的同時(shí)，降低生產(chǎn)成本、簡化操作程序等方面進(jìn)行探索研究。試驗(yàn)結(jié)果表明同培養(yǎng)液條件下廉價(jià)的35mm dish組的卵裂率顯著高于（P<0.05）昂

2、貴的4孔板組，囊胚發(fā)育率沒有差異；PBS液精子處理組與BO液精子處理組卵裂率與囊胚率均沒有差異，但PBS組相比BO組操作簡便且成本低廉；受精時(shí)間的比較研究中PBS22h組比PBS6h組，BO6h、22h組都有顯著性差異（P<0.05）。
　　2.提高囊胚質(zhì)量和增加囊胚細(xì)胞數(shù)是十分重要的，含有大量細(xì)胞數(shù)的囊胚有利于單囊胚分析。正常情況下想要進(jìn)行DNA的分析往往需要若干個(gè)囊胚才能做到，如果能增加單個(gè)囊胚的細(xì)胞數(shù)，我們僅需一個(gè)囊胚便可進(jìn)

3、行DNA分析。囊胚移植是目前為止牛胚胎移植技術(shù)最常用的方法，高質(zhì)量形態(tài)的囊胚和具有大量細(xì)胞數(shù)的囊胚移植后可提高妊娠率。胚胎干細(xì)胞（ES）是來源于囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ICM），目前已建立人和小鼠的胚胎干細(xì)胞，但科學(xué)家試圖從家畜建立ES細(xì)胞系都失敗了，部分原因是由于沒有制定合適的培養(yǎng)條件，因此，制備一種可獲得更大內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的新型體外培養(yǎng)體系，來提高ES細(xì)胞系建立的成功率迫在眉睫。
　　本試驗(yàn)通過比較人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞（hiPS）培養(yǎng)基與牛體外

4、培養(yǎng)II型（B-IVC-II）培養(yǎng)基，探究了兩種培養(yǎng)基對牛體外受精早期胚胎的影響。將體外受精后牛囊胚分別在hiPS培養(yǎng)基、B-IVC-II培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天，測量囊胚直徑，結(jié)果顯示hiPS培養(yǎng)基組顯著高于B-IVC-II培養(yǎng)基組，直徑分別為150.30±29.49μm與195.58±41.59μm（P<0.01），并且牛囊胚總細(xì)胞數(shù)hiPS培養(yǎng)基組顯著高于B-IVC-II培養(yǎng)基組，相差2倍之多，細(xì)胞數(shù)分別為172.12±45.08，604

5、.83±242.64（P<0.01）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，hiPS培養(yǎng)基可以顯著提高牛囊胚的質(zhì)量。
　　3.首次獲得地方特色品種延邊黃牛的體外受精胚胎移植牛。本試驗(yàn)通過以本地飼養(yǎng)量較大的延邊黃牛作為受體母牛，通過胚胎移植技術(shù)手段改善肉牛繁殖效率，增加母牛產(chǎn)仔率等。同期發(fā)情技術(shù)、胚胎移植技術(shù)等生物技術(shù)的研究、改良及推廣，能夠加速規(guī)模化養(yǎng)殖進(jìn)程，在地方特色品種的保護(hù)和擴(kuò)繁上發(fā)揮關(guān)鍵性作用。本實(shí)驗(yàn)表明同期發(fā)情組1（添加維生素ADE）、同期發(fā)