Nelin基因與冠心病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討Nelin基因突變與冠心病易感性及危險(xiǎn)因素的相關(guān)性，同時(shí)探討缺血缺氧損傷對(duì)大鼠心肌細(xì)胞Nelin基因表達(dá)的影響。
　　方法：(1)采用DNA序列測(cè)定技術(shù)，檢測(cè)101例冠心病患者和114例健康人Nelin基因外顯子及外顯子/內(nèi)含子連接區(qū)的核苷酸序列。利用核酸序列分析軟件與Genbank的Nelin基因序列比對(duì)，對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行序列分析。(2)檢測(cè)受試對(duì)象的身高、體重和血壓，用ELISA法檢測(cè)血清Nelin水平，全自動(dòng)生化分

2、析儀檢測(cè)血清TC、HDL-C、LDL-C、TG、Hs-CRP、Glu、Cr水平，分析Nelin基因變異與以上各指標(biāo)之間的關(guān)系。(3)培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞，體外模擬心肌細(xì)胞缺血缺氧條件，用RT-PCR、Western blot方法檢測(cè)缺血缺氧損傷的心肌細(xì)胞Nelin基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)通過(guò)對(duì)Nelin基因外顯子SNP位點(diǎn)的序列分析，共發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNP位點(diǎn)。其中1個(gè)為NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中報(bào)道的rs1166698位點(diǎn)，新發(fā)現(xiàn)1個(gè)位點(diǎn)

3、。rs1166698位點(diǎn)為第8外顯子區(qū)G/A錯(cuò)義突變（48364365 G/A），對(duì)照組基因型頻率為GG：31.6％，GA：52.6%，AA：15.8%，等位基因頻率為G：57.9%，A：42.1%。冠心病組基因型頻率為GG：33.7%，GA：49.5%，AA：16.8%，等位基因頻率為G：58.45%，A：41.45%。冠心病組Nelin基因rs1166698位點(diǎn)AA基因型和A等位基因頻率均較對(duì)照組偏低，但二者均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)冠

4、心病組血清Nelin水平為0.88±0.74 ng/ml，對(duì)照組為0.31±0.18 ng/ml，冠心病組明顯高于對(duì)照組(P<0.001),冠心病有60.4%的患者Nelin水平升高。冠心病組Hs-CRP、Glu、LDL-C水平明顯高于對(duì)照組(P<0.001)，HDL-C水平明顯偏低(P<0.001)。(3) Nelin基因rs1166698位點(diǎn)AA型與GG+GA型比較，Nelin水平、HDL-C偏高，其它指標(biāo)均偏低，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P>0.05)。(4)缺血缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞，經(jīng)RT-PCR、Western blot檢測(cè)，結(jié)果隨著缺血缺氧時(shí)間的增加，Nelin基因mRNA和蛋白的表達(dá)量逐漸減少。
　　結(jié)論：冠心病組血清Nelin水平明顯高于對(duì)照組，60.4%的冠心病患者Nelin水平升高，說(shuō)明Nelin基因與冠心病存在一定關(guān)聯(lián)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果未發(fā)現(xiàn)Nelin基因rs1166698多態(tài)性位點(diǎn)與冠心病相關(guān)。缺血缺氧下調(diào)心肌細(xì)胞Nelin表達(dá)。提示Nelin基因很可能在