云南狂犬病野外毒株N和G基因的克隆、測序及酵母表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf

1、根據(jù)已知狂犬病毒株核蛋白基因(N)和糖蛋白基因(G)序列設(shè)計合成了4對檢測引物和2對克隆引物，建立了狂犬病RT-PCR及套式PCR診斷技術(shù)；自英國引進(jìn)3株熒光素標(biāo)記的針對狂犬病毒核蛋白的單克隆抗體，建立了狂犬病直接免疫熒光診斷技術(shù)。使用建立的診斷方法對云南省部分地區(qū)的56份犬腦組織樣品(小腦、腦干、海馬角)進(jìn)行檢測，結(jié)果檢出陽性樣品共計12份，陽性率21.4％。病犬腦組織樣品RT-PCR和套式PCR檢測結(jié)果與直接免疫熒光試驗結(jié)果一致。同

2、時對2006-2007年間云南曲靖(YNQJ07)、昭通(YNZT07)、楚雄(YNMD06)、保山(YNTC06)狂犬病毒株N基因和G基因進(jìn)行RT-PCR．?dāng)U增，克隆至pMDl8-T載體進(jìn)行測序，并與已知代表性毒株進(jìn)行比對及系統(tǒng)發(fā)育分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：云南狂犬病毒株均屬于基因Ⅰ型毒株，YNQJ07、YNZT07、YNMD06以及近年部分廣西、浙江、江蘇、湖北、安徽、江西省毒株N基因和G基因核酸序列同源性分別介于97.0～98.3％、97.

3、4～98.3％，與其它基因Ⅰ型毒株同源性分別介于86.3～90.2％、82.9～93.0％。YNTC06與泰國和部分廣西毒株同源性介于95.0～95.8％，與其它基因I型毒株同源性介于82.9～92.9％。研究表明YNQJ07、YNZT07、YNMD06屬于亞組群Ⅱ毒株，YNTC06毒株屬于亞組群Ⅲ毒株，云南狂犬病毒核蛋白和糖蛋白存在特異性氨基酸變異位點。用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ(N基因)或Kpn Ⅰ(G基因)雙酶切目的基因PCR產(chǎn)物