豬偽狂犬病病毒FZ株UL17基因的克隆、序列分析及原核表達載體的構建.pdf

1、豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)目前己成為對養(yǎng)豬業(yè)危害最大的疾病之一，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，盡管該病的根除計劃在美國和歐洲已取得顯著成效，但對大多數(shù)國家而言，這仍是一個非常嚴峻的問題。作為皰疹病毒生物學研究的良好模型之一，豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)已經(jīng)受到越來越多的關注。PRV UL17基因全長1736bp1編碼597個氨基酸，分子量為64kDa，其編碼產(chǎn)物已被證實是病毒衣殼的組

2、成成分之一，與病毒NDA的切割及包裝有關。本研究從本實驗室分離鑒定并保存的PRV FZ株中克隆到UL17基因，并構建了原核表達載體pET-UL17。 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的PRV UL17基因序列，設計一對特異性引物，以病毒DNA作為模板，通過PCR技術擴增UL17基因，將擴增片段克隆于pMD-18TSimple Vector進行測序。由于G+C含量太高，導致序列未能完全測通，已測出1736bp，未測通片段大小約60bp。

3、應用DNAStar序列分析軟件分析，結果表明，已成功克隆到UL17基因，且與已報道的Ea株及Ka株核苷酸序列同源性均在96％以上。用在線Conserved Domain Search工具進行保守功能區(qū)分析，發(fā)現(xiàn)UL17蛋白含有兩個保守的功能域。氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，其編碼產(chǎn)物含有蛋白激酶C磷酸化位點和酪蛋白激酶2磷酸化位點，表明UL17蛋白質可能是磷酸化蛋白質。 通過將UL17基因插入原核表達載體pET-32a(+)，構建重組質粒