豬偽狂犬病病毒FZ株UL17基因的克隆、序列分析及原核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)目前己成為對養(yǎng)豬業(yè)危害最大的疾病之一，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，盡管該病的根除計(jì)劃在美國和歐洲已取得顯著成效，但對大多數(shù)國家而言，這仍是一個(gè)非常嚴(yán)峻的問題。作為皰疹病毒生物學(xué)研究的良好模型之一，豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注。PRV UL17基因全長1736bp1編碼597個(gè)氨基酸，分子量為64kDa，其編碼產(chǎn)物已被證實(shí)是病毒衣殼的組

2、成成分之一，與病毒NDA的切割及包裝有關(guān)。本研究從本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存的PRV FZ株中克隆到UL17基因，并構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-UL17。 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的PRV UL17基因序列，設(shè)計(jì)一對特異性引物，以病毒DNA作為模板，通過PCR技術(shù)擴(kuò)增UL17基因，將擴(kuò)增片段克隆于pMD-18TSimple Vector進(jìn)行測序。由于G+C含量太高，導(dǎo)致序列未能完全測通，已測出1736bp，未測通片段大小約60bp。

3、應(yīng)用DNAStar序列分析軟件分析，結(jié)果表明，已成功克隆到UL17基因，且與已報(bào)道的Ea株及Ka株核苷酸序列同源性均在96％以上。用在線Conserved Domain Search工具進(jìn)行保守功能區(qū)分析，發(fā)現(xiàn)UL17蛋白含有兩個(gè)保守的功能域。氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，其編碼產(chǎn)物含有蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)和酪蛋白激酶2磷酸化位點(diǎn)，表明UL17蛋白質(zhì)可能是磷酸化蛋白質(zhì)。 通過將UL17基因插入原核表達(dá)載體pET-32a(+)，構(gòu)建重組質(zhì)粒