IL-33-ST2軸在結(jié)核性胸腔積液中的免疫學(xué)作用.pdf

1、目的：研究IL-33/ST2軸對人T淋巴細(xì)胞亞群分化的影響及損傷的胸膜間皮細(xì)胞修復(fù)作用，從而探討IL-33/ST2軸在結(jié)核性胸腔積液中的免疫學(xué)作用。
　　方法：募集結(jié)核性胸腔積液患者18例，惡性胸腔積液患者6例，正常健康人6例，應(yīng)用RT-PCR、Wstern-blot兩種方法從基因和蛋白水平檢測結(jié)核性胸腔積液中IL-33的主要來源。并比較三組樣本外周血或胸腔積液淋巴細(xì)胞IL-33表達(dá)水平；檢測Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞

2、上ST2的表達(dá)，進(jìn)一步從基因水平檢測IL-33對各T細(xì)胞亞群特異性轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響，反映IL-33對T細(xì)胞亞群誘導(dǎo)分化作用。應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測來自TPE患者的壁層胸膜標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，胸膜間皮細(xì)胞上ST2的表達(dá)，體外建立胸膜間皮細(xì)胞的損傷模型，檢測不同時(shí)間點(diǎn)重組人細(xì)胞因子IL-33/ST2軸對損傷的胸膜間皮細(xì)胞的早期及長期修復(fù)作用。
　　結(jié)果：
　?。ā┙Y(jié)核性胸腔積液中提取的胸膜間皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞都表達(dá)IL-

3、33蛋白，且胸膜間皮細(xì)胞上IL-33蛋白的表達(dá)量顯著高于淋巴細(xì)胞（n=6,p<0.05)。結(jié)核性（n=6）和惡性(n=6)胸腔積液患者胸水淋巴細(xì)胞IL-33的表達(dá)量均高于相應(yīng)的外周血（p<0.05）。結(jié)核性胸腔積液組和惡性胸腔積液組外周血淋巴細(xì)胞IL-33蛋白的表達(dá)量均高于健康對照組（p<0.05），但是結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液外周血淋巴細(xì)胞中IL-33蛋白的表達(dá)量無顯著差異（p>0.05）。從mRNA水平上檢測的結(jié)果和蛋白水平的檢

4、測結(jié)果是一致的。
　　（二）在Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞亞群上均檢測到ST2mRNA的表達(dá)，在Th2和Treg誘導(dǎo)環(huán)境下ST2 mRNA表達(dá)增加，而在Th1/Th17環(huán)境下表達(dá)是降低的。IL-33誘導(dǎo)結(jié)核性胸腔積液中Th2和Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA3和FOXP3 mRNA表達(dá)升高，同時(shí)Th2細(xì)胞表達(dá)的2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13 mRNA表達(dá)也增高，IL-33和IL-4在促進(jìn)Th2細(xì)胞表達(dá)GAT

5、A3 mRNA時(shí)具有協(xié)同作用，在缺乏IL-4時(shí)IL-33也能誘導(dǎo)GATA3 mRNA表達(dá)增加。IL-33增強(qiáng)能TGF-β誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞FOXP3 mRNA的表達(dá)，但是在缺乏TGF-β時(shí)，IL-33不能引起Treg細(xì)胞表達(dá)FOXP3 mRNA表達(dá)增加。IL-33抑制Th1/Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet和RORC mRNA表達(dá)，Th17表達(dá)的IL-17AmRNA也下調(diào)。IL-33對這些細(xì)胞亞群的誘導(dǎo)分化作用是通過作用于ST2受體

6、實(shí)現(xiàn)的，當(dāng)預(yù)先用抗人的ST2抗體加入培養(yǎng)基中，IL-33所引起上述誘導(dǎo)分化作用基本消失，但是IL-33不能阻斷IL-4刺激引起的Th2細(xì)胞GATA3 mRNA的增加，說明Th2細(xì)胞GATA3的表達(dá)時(shí)非ST2依賴性質(zhì)的；
　　（三）應(yīng)用免疫熒光學(xué)技術(shù)檢測首次發(fā)現(xiàn)：胸膜間皮細(xì)胞上高表達(dá)ST2。體外胸膜間皮細(xì)胞的損傷實(shí)驗(yàn)表明：IL-33通過促進(jìn)胸膜間皮細(xì)胞的活性及促進(jìn)其增值而促進(jìn)胸膜間皮細(xì)胞的早期及遠(yuǎn)期修復(fù)。
　　結(jié)論：胸膜間皮細(xì)