長白山野生食用菌的抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：
　　我國是世界上最早食用并栽培食用菌的國家,是食用菌生產(chǎn)第一大國，具有源遠(yuǎn)流長的歷史文化。我國目前已發(fā)現(xiàn)野生的食用菌有850余種,但只有少數(shù)品種開發(fā)利用,未開發(fā)的野生食用菌占絕大多數(shù)?，F(xiàn)代科學(xué)已經(jīng)能夠從分子水平上證實(shí)食用菌的特殊營養(yǎng)保健功能及其藥用價值,食用菌類食品以其天然、安全、富有營養(yǎng)、具有調(diào)節(jié)人體多項(xiàng)生理功能而贏得越來越多人的青睞。長白山位于吉林省東南部，地域遼闊，森林覆蓋率高并且雨量充沛、氣候適宜，野生食用菌資源十

2、分豐富，且種類繁多，是一座天然的“野生食用菌資源的立體寶庫”。本論文對長白山野生食用菌的抗腫瘤活性進(jìn)行研究，為繼續(xù)開發(fā)長白山野生食用菌的保健作用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.為研究長白山野生食用菌抗腫瘤活性，本試驗(yàn)以靈芝、桑黃、猴頭蘑、樺褐孔菌和香菇等野生食用菌為研究對象，首先將五種菌粉碎，將粉末浸泡在10倍量的70％乙醇中24 h，加熱回流提取2次，每次2 h，趁熱過濾，合并兩次過濾，放置，回收乙醇，冷凍干燥備用；<

3、br>　　2.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：以靈芝、桑黃、猴頭蘑、樺褐孔菌、香菇的70%醇提物為藥物，配制藥物濃度為0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1 mg/mL，以人體肝癌細(xì)胞HepG2、人體子宮宮頸癌細(xì)胞HeLa、人體乳房癌細(xì)胞MCF-7、人體胃癌細(xì)胞 AGS、人體肺癌細(xì)胞 A549和人體正常腎臟細(xì)胞293為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)測定以上五種食用菌的抑制腫瘤細(xì)胞生長的效果；
　　3.體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)：以靈芝、桑黃

4、、猴頭蘑、樺褐孔菌、香菇的70%醇提物為藥物，配制藥物濃度為0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1 mg/mL，以人體肝癌細(xì)胞HepG2、人體子宮宮頸癌細(xì)胞HeLa、人體乳房癌細(xì)胞MCF-7、人體胃癌細(xì)胞AGS、人體肺癌細(xì)胞A549為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)測定以上五種食用菌的抑制腫瘤細(xì)胞生長；并利用小鼠S-180移植性腫瘤方法對以上食用菌的抗腫瘤作用進(jìn)行研究，隨機(jī)分成空白對照組、五種菌高、中、低劑量組分別按2

5、50、125、25 mg/kg劑量灌胃給藥，每天一次，空白對照組每天灌胃蒸餾水0.1 mL/10g，連續(xù)給藥12天。末次給藥后24 h，處死動物，解剖剝離瘤塊，稱瘤重，計算腫瘤生長抑制率。
　　結(jié)果：
　　1.體外抗腫瘤試驗(yàn)：靈芝、桑黃、猴頭蘑、樺褐孔菌、香菇70%乙醇提取物具有較高的抑制腫瘤細(xì)胞生長效果。人體子宮宮頸癌細(xì)胞（HeLa）在試劑濃度為1.0 mg/mL條件下，靈芝、猴頭蘑和香菇表現(xiàn)出對70%以上的癌細(xì)胞生長抑制

6、效果，尤其是靈芝的濃度在0.75 mg/mL條件能達(dá)到81.0%的高生長抑制效果。另外試劑濃度為1.0 mg/mL時，對人體肝癌細(xì)胞HepG2生長抑制效果，猴頭蘑和靈芝分別為76.3%和71%。對人體乳房癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞毒性試劑最高濃度為1 mg/mL桑黃的最高生長抑制率為81.5%，猴頭蘑和樺褐孔菌的抑制率分別為76.6%和75.1%。在同一試劑濃度下，香菇和靈芝對人體胃癌細(xì)胞AGS的癌細(xì)胞生長抑制效果分別為88.7%和87.0%

7、。各蘑菇對人體癌細(xì)胞生長抑制效果隨著試劑濃度增加而增加。
　　2.靈芝對人體子宮宮頸癌細(xì)胞HeLa在藥物濃度為0.75 mg/mL時抑制率為70%以上，藥物濃度為1 mg/mL時抑制率為83%。本實(shí)驗(yàn)說明靈芝等五種野生食用菌對特定癌細(xì)胞具有較高的生長抑制效果。另外藥物濃度為1 mg/mL時桑黃對HeLa的抑制率為65%。在藥物濃度為1 mg/mL時猴頭蘑對HeLa的抑制率為76.4%，同一濃度下樺褐孔菌對HeLa的抑制率為78.5

8、%。同樣在藥物濃度為1 mg/mL時香菇對HeLa的抑制率為75%，五種食用菌對癌細(xì)胞的抑制率隨著濃度增加呈依存關(guān)系。
　　在藥物最高濃度為1 mg/mL時，五種野生食用菌對癌細(xì)胞HeLa的細(xì)胞毒性都在70%以上，對人體腎臟正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性低于40%。這種藥物對癌細(xì)胞生長有較高的抑制作用，但是對正常細(xì)胞有較低的細(xì)胞毒性。
　　3.五種野生食用菌乙醇提取物的體內(nèi)抗癌效果利用 Sarcoma-180腫瘤細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說