三帶喙庫(kù)蚊對(duì)重要?dú)⑾x(chóng)劑靶標(biāo)抗性及其對(duì)乙腦病毒易感性研究.pdf

1、三帶喙庫(kù)蚊(Culextritaeniorhynchus)是我國(guó)流行性乙型腦炎(JapaneseBencephalitis,乙腦)的主要傳播媒介。其孳生地多為稻田,廣泛接觸農(nóng)業(yè)用殺蟲(chóng)劑,由于殺蟲(chóng)劑的連續(xù)大量使用加之蚊蟲(chóng)世代歷期短、繁殖力強(qiáng)等因素,導(dǎo)致了三帶喙庫(kù)蚊抗藥性的發(fā)生和發(fā)展。目前我國(guó)不同地區(qū)三帶喙庫(kù)蚊已經(jīng)對(duì)多種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了不同程度的抗性,因此迫切需要對(duì)殺蟲(chóng)劑抗性的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)行深入研究。蚊蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性的同時(shí),往往伴隨著某些生理生化

2、功能的改變,而蚊蟲(chóng)生理生化功能的改變會(huì)影響蟲(chóng)媒病毒在其體內(nèi)的增殖發(fā)育,最終影響蚊蟲(chóng)對(duì)疾病的傳播。本研究以野外采集的三帶喙庫(kù)蚊種群為研究對(duì)象,測(cè)定其生物抗性,并對(duì)其靶標(biāo)基因(鈉離子通道基因和乙酰膽堿酯酶基因)進(jìn)行研究,分析基因頻率與生物抗性之間的相關(guān)性,了解三帶喙庫(kù)蚊種群Kdr和AChE抗性基因頻率的現(xiàn)狀并推測(cè)抗性發(fā)展趨勢(shì)。另外還對(duì)不同種群三帶喙庫(kù)蚊進(jìn)行經(jīng)口感染乙腦病毒,并測(cè)定各感染種群對(duì)溴氰菊酯和高效氯氰菊酯的抗性水平,分析抗性水平與感

3、染率之間的相關(guān)性,初步探索抗性對(duì)于媒介蚊蟲(chóng)易感性的影響。
　　本研究結(jié)果如下:
　　1.三帶喙庫(kù)蚊自然種群抗性水平檢測(cè)結(jié)果
　　幼蟲(chóng)抗性檢測(cè)結(jié)果顯示:各自然種群三帶喙庫(kù)蚊幼蟲(chóng)對(duì)常用的5種殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了不同程度的抗性。對(duì)溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、氯菊酯、敵敵畏和殘殺威的抗藥性指數(shù)分別為:(1.70-103.93)、(7.83-65.81)、(3.54-75.70)、(291.85-530.89)和(51.32至108.83)

4、倍。成蟲(chóng)抗性檢測(cè)結(jié)果顯示:6個(gè)自然種群成蚊對(duì)溴氰菊酯(0.025％)的KT50值為36.99至89.96min,1小時(shí)擊倒率為16.67%至66.33%,24小時(shí)死亡率為5.17%至75.25%;4個(gè)三帶喙庫(kù)蚊種群對(duì)氯菊酯(0.5%)的KT50值為6.63至160.37min,3小時(shí)擊倒率為51.92%至100.00%,24小時(shí)死亡率為15.38%至91.30%。
　　2.三帶喙庫(kù)蚊擊倒抗性的研究
　　通過(guò)克隆測(cè)序獲得敏感和

5、抗性三帶喙庫(kù)蚊鈉通道ⅡS4-ⅡS6區(qū)段部分cDNA序列,該序列長(zhǎng)度為360bp,包含L1014(Kdr)突變位點(diǎn),編碼120個(gè)氨基酸殘基。敏感序列Genbank登錄號(hào)為:KC878694。與敏感個(gè)體相比,抗性個(gè)體鈉通道ⅡS4-ⅡS6區(qū)段cDNA序列1014位點(diǎn)堿基“A”突變?yōu)椤癟”,導(dǎo)致相應(yīng)位置亮氨酸(L)突變?yōu)楸奖彼?F)。不同地理種群的三帶喙庫(kù)蚊鈉通道內(nèi)含子長(zhǎng)度和堿基組成具有多態(tài)性。
　　3.三帶喙庫(kù)蚊kdr基因頻率與抗性水

6、平的相關(guān)性分析
　　各個(gè)自然種群kdr基因頻率在10.00%至39.55%?？剐约兒献?RR)在部分種群未檢測(cè)出,其余種群抗性純合子(RR)個(gè)體在檢測(cè)樣本中所占比例為(2.86-10.00%);敏感純合子(SS)為(50.00-80.00%);雜合子(RS)為(17.65-50.00%)。三帶喙庫(kù)蚊種群幼蟲(chóng)對(duì)3種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑的致死中濃度(LC50)與Kdr基因頻率有一定的相關(guān)性。對(duì)溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和氯菊酯半數(shù)致死濃度(

7、LC50)與kdr基因頻率之間的相關(guān)系數(shù)分別為0.7150、0.6874和0.4280,P值都小于0.05。提示kdr等位基因突變(L1014F)可以作為三帶喙庫(kù)蚊對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑抗性的分子標(biāo)記。
　　4.三帶喙庫(kù)蚊乙酰膽堿酯酶(AChE)基因與抗性水平的相關(guān)性分析
　　RT-PCR法獲得AChE基因部分cDNA序列,長(zhǎng)709bp?？剐云废礎(chǔ)ChE基因片段第250-251號(hào)堿基“TT”突變?yōu)椤癎G”,突變導(dǎo)致相應(yīng)位置氨基

8、酸由苯丙氨酸(F)突變?yōu)樯彼?W)發(fā)生變化,即F455W突變。AChE基因頻率的檢測(cè)結(jié)果顯示:所有檢測(cè)樣本AChE基因型都為抗性純合子(RR),AChE基因頻率都為100%。提示該等位基因突變(F455W)已經(jīng)不可以作為三帶喙庫(kù)蚊對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑抗性的分子標(biāo)記。
　　5.三帶喙庫(kù)蚊對(duì)乙腦病毒易感性與其抗性水平的相關(guān)性分析
　　三帶喙庫(kù)蚊實(shí)驗(yàn)室品系、南京江浦種群F1、濉溪南坪種群F1代、安康建民種群F1代和F3代