HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥及其臨床表型的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:
　　抑郁癥是一種常見的情感障礙，其核心癥狀為情緒低落、興趣缺乏以及樂趣喪失。其發(fā)病率逐年上升，預(yù)計(jì)到2020年抑郁癥的發(fā)病率將達(dá)到總?cè)丝诘?0％，成為全球第二大常見疾病。新近研究表明，抑郁癥是一種涉及多機(jī)制的復(fù)雜性疾病，是由遺傳、體質(zhì)、性格、環(huán)境等多因素引發(fā)。家系研究、雙生子和寄養(yǎng)子研究已證實(shí)了遺傳因素在抑郁癥發(fā)病中的重要作用，其遺傳度約為40％～70％，但是抑郁癥的遺傳模型是復(fù)雜的。隨著分子遺傳學(xué)的發(fā)展，著重于探索抑郁癥

2、致病基因或易感基因的研究迅速開展。
　　研究表明，5-HT3受體與人體許多復(fù)雜的功能紊亂有關(guān)，包括精神障礙、認(rèn)知功能障礙、藥物濫用、腸易激綜合征等。5-HT3受體的異常表達(dá)可影響5-HT、DA、γ-氨基丁酸、P物質(zhì)以及乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。HTR3A的基因位于染色體11q23，雙生子和家系的研究也表明抑郁癥的易感基因位于染色體11q23相同的區(qū)域。因此，HTR3A被認(rèn)為是抑郁癥病因和發(fā)病機(jī)制中最為重要的候選基因之一。對(duì)HTR3

3、A所進(jìn)行的關(guān)聯(lián)分析研究揭示，HTR3A基因的多態(tài)性與雙相情感障礙和重性抑郁障礙相關(guān)聯(lián)。但是目前在中國(guó)人群中尚未見到HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥的關(guān)聯(lián)性研究報(bào)道。
　　單核苷酸多態(tài)性(SNP)在人類基因組中廣泛存在，多態(tài)信息量大，易于檢測(cè)和統(tǒng)計(jì)分析，已經(jīng)成為新一代的遺傳標(biāo)記的方法。應(yīng)用SNP作為遺傳標(biāo)記來(lái)尋找復(fù)雜性疾病的遺傳危險(xiǎn)因素，發(fā)現(xiàn)與復(fù)雜性疾病相關(guān)的DNA序列上SNP位點(diǎn)，是了解引起人類疾病的復(fù)雜原因的最重要途徑之一。

4、　　因此，本研究選取高度同質(zhì)的中國(guó)北方漢族單相抑郁癥患者，檢測(cè)5-HT3A受體(HTR3A)基因的單核苷酸多態(tài)性分布，通過病例-對(duì)照關(guān)聯(lián)分析探索HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥發(fā)病的關(guān)聯(lián)性，研究基因型對(duì)患者抑郁及焦慮嚴(yán)重程度、臨床亞型程度和認(rèn)知功能的影響，為闡明HTR3A基因多態(tài)性在抑郁癥病因?qū)W中的作用，預(yù)測(cè)抑郁癥的遺傳易感性提供重要的參考依據(jù)。
　　方法:
　　本研究病例組為2012年1月～2014年3月山東省精神衛(wèi)生中心門診

5、或者住院患者，均符合DSM-Ⅳ重性抑郁障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組為招募的健康志愿者，其性別、年齡、文化程度與病例組相匹配。所有研究對(duì)象均為中國(guó)北方漢族血統(tǒng)。
　　入組次日抽取所有研究對(duì)象外周靜脈血。采用DNA提取試劑盒提取基因組DNA。利用飛行-時(shí)間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF)和Sequenom MassArray平臺(tái)對(duì)HTR3A基因的10個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(rs10789980、rs1062613、rs11604247、rs1176722

6、、rs2276302、rs1176719、rs10160548、rs1176713、rs1182457和rs897685)進(jìn)行基因型的檢測(cè)。
　　使用漢密頓抑郁量表(HAMD)和漢密頓焦慮量表(HAMA)評(píng)估病例組患者的臨床癥狀。選用連線測(cè)驗(yàn)、符號(hào)編碼測(cè)驗(yàn)、言語(yǔ)流暢性測(cè)驗(yàn)、數(shù)字序列測(cè)驗(yàn)、空間廣度測(cè)驗(yàn)、詞語(yǔ)學(xué)習(xí)測(cè)驗(yàn)、簡(jiǎn)易視覺測(cè)驗(yàn)、迷宮測(cè)驗(yàn)、Stroop色詞測(cè)驗(yàn)和情緒管理能力測(cè)驗(yàn)等十項(xiàng)認(rèn)知測(cè)驗(yàn)評(píng)估所有研究對(duì)象的認(rèn)知功能。
　　采

7、用Plink軟件，計(jì)算基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，計(jì)算所有SNP位點(diǎn)的基因型頻率、等位基因頻率、比值比(OR)和95％可信區(qū)間(95％CI)。采用Haploview4.2軟件進(jìn)行連鎖不平衡和單體型分析。采用SPSS20.0軟件分析10個(gè)SNP位點(diǎn)與抑郁癥發(fā)病、抑郁癥患者的臨床表型以及認(rèn)知功能的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)
　　對(duì)病例組240例抑郁癥患者和

8、對(duì)照組232例健康志愿者HTR3A的10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)分別進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。結(jié)果顯示，無(wú)論是病例組還是對(duì)照組，這10個(gè)位點(diǎn)的P值均＞0.05（P=0.321～0.995），表示它們均符合H-W平衡定律，說明本研究抽樣樣本符合遺傳學(xué)分析。
　　2.HTR3A SNP位點(diǎn)基因多態(tài)性與抑郁癥的關(guān)聯(lián)分析
　　(1)兩組的HTR3ASNP位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率比較
　　rs1176713位點(diǎn)的基因型頻

9、率和等位基因頻率分布在病例組和對(duì)照組中均具有顯著性差異(P＜0.05)，rs1176719位點(diǎn)的等位基因頻率分布在病例組和對(duì)照組中具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　(2)HTR3A SNP位點(diǎn)等位基因的關(guān)聯(lián)分析
　　rs1176719位點(diǎn)的A等位基因頻率分布在病例組和對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.9，P=0.015)，且OR值大于1，表明rs1176719位點(diǎn)的A等位基因與抑郁癥的發(fā)病有關(guān)聯(lián)性。
　　rs

10、1176713位點(diǎn)的C等位基因頻率分布在病例組和對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.788，P=0.028)，且OR值大于1，說明1176713位點(diǎn)的C等位基因與抑郁癥的發(fā)病相關(guān)。
　　(3)不同性別病例組和對(duì)照組的各位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率比較
　　rs1176719的A等位基因與男性抑郁癥的發(fā)病有顯著關(guān)聯(lián)性(OR=1.586，95％CI:1.023～2.459, STAT=2.061,P=0.039)。
　

11、　rs1062613，rs11604247，rs1176722，rs10160548，rs897685和rs1182457等六個(gè)位點(diǎn)的基因型頻率分布在男性與女性病例組和對(duì)照組間均具有顯著性差異(P＜0.05)。rs10789980和rs2276302的基因型頻率分布在男性病例組和對(duì)照組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(4)LD和單體型分析
　　本研究所選擇HTR3A的10個(gè)SNP位點(diǎn)中多數(shù)SNP存在一定的連鎖

12、不平衡。依據(jù)病例組和對(duì)照組所有樣本共有2個(gè)單體型板塊，block1和block2，其中block1的GAG(x2=5.883，P=0.015)及AGA(x2=3.958，P=0.047)在病例組和對(duì)照組之間的差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥患者臨床表型的關(guān)聯(lián)分析
　　(1)HTR3A基因多態(tài)性與抑郁嚴(yán)重程度及HAMD各因子分的相關(guān)分析
　　不同抑郁組之間基因型和等位基因頻率分

13、布具有顯著性差異的位點(diǎn)為rs1062613,rs1176722,rs2276302,rs1176719和rs1182457(P=0.000～0.036),rs1176713位點(diǎn)不同抑郁組之間的基因型頻率分布具有顯著性差異（P＜0.05），rs11604247位點(diǎn)不同抑郁組之間的等位基因頻率分布具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　rs1062613，rs1176722，rs1176713，rs1176719和rs10789980五

14、個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)不同基因型的HAMD因子分和總分具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　(2)HTR3A基因多態(tài)性與焦慮嚴(yán)重程度及HAMA各因子分的相關(guān)分析
　　rs10789980，rs11604247，rs1176713和rs10160548這四個(gè)位點(diǎn)不同焦慮程度組別的基因型頻率分布具有顯著性差異(P=0.002～0.015);rs1176719，rs1176713和rs10160548這三個(gè)位點(diǎn)不同焦慮程度組別的等位基因頻率

15、分布具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　rs1176713和rs1176719這兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)不同基因型的HAMA因子分和總分比較具有顯著性差異(P＜0.05)，其他位點(diǎn)不同基因型的HAMA總分及因子分無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　4.HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥患者認(rèn)知功能的關(guān)聯(lián)分析
　　(1)病例組和對(duì)照組認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)比較
　　除連線測(cè)驗(yàn)和簡(jiǎn)易視覺測(cè)驗(yàn)外，病例組的各項(xiàng)認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)與對(duì)照組比較均具有顯著

16、性差異(P＜0.05)。
　　(2)病例組一般資料與認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)的相關(guān)性
　　除情緒管理測(cè)驗(yàn)外，病例組研究對(duì)象的年齡與各項(xiàng)認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)均具有顯著相關(guān)性(P)＜0.05)，文化程度與符號(hào)編碼測(cè)驗(yàn)成績(jī)具有顯著相關(guān)性（P＜0.05）。而性別與各項(xiàng)認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)均不具有顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　(3)HTR3A SNP位點(diǎn)基因型與認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)的相關(guān)分析
　　rs10789980位點(diǎn)不同基因型的連線測(cè)驗(yàn)、詞語(yǔ)學(xué)習(xí)測(cè)驗(yàn)

17、、Stroop色詞和空間廣度正序測(cè)驗(yàn)成績(jī)具有顯著性差異（P＜0.05）。rs10160548位點(diǎn)不同基因型的詞語(yǔ)學(xué)習(xí)測(cè)驗(yàn)、簡(jiǎn)易視覺測(cè)驗(yàn)、Stroop色詞測(cè)驗(yàn)和迷宮測(cè)驗(yàn)具有顯著性差異(P＜0.05)。其余8個(gè)位點(diǎn)不同基因型的認(rèn)知測(cè)驗(yàn)成績(jī)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.HTR3A基因的rs1176719和rs1176713位點(diǎn)多態(tài)性可能與中國(guó)漢族人群抑郁癥發(fā)病相關(guān)，HTR3A基因可能是抑郁癥的易感基因