ADDLs對(duì)AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)及突觸可塑性的影響.pdf

1、目的：本文旨在闡明ADDLs對(duì)AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)影響的機(jī)制，揭示ADDLs降低AMPA受體在細(xì)胞膜表面表達(dá)，導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的分子機(jī)制。本研究將拓寬研究AD疾病的新思路，并為基于AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的神經(jīng)保護(hù)治療和藥物研發(fā)提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：應(yīng)用培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元利用細(xì)胞膜組分提取、免疫印跡方法觀察ADDLs對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元GluA1-3亞基在細(xì)胞膜表達(dá)的影響;D1R激動(dòng)劑和抑制劑、中藥左旋千金藤啶堿（l-SPD）對(duì)AD

2、DLs降低GluA1亞基磷酸化及AMPA受體在細(xì)胞膜上表達(dá)的保護(hù)作用。應(yīng)用APP轉(zhuǎn)基因小鼠，通過(guò)morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)比較APP轉(zhuǎn)基因小鼠和WT小鼠在空間記憶方面的差異及機(jī)制;采用細(xì)胞膜組分提取、免疫印跡方法比較APP轉(zhuǎn)基因小鼠和WT小鼠海馬GluA1-3亞基在細(xì)胞膜表面表達(dá)的差異及其機(jī)制;腹腔注射左旋千金藤啶堿l-SPD，觀察是否改善記憶及認(rèn)知功能及是否改善GluA1-3亞基在細(xì)胞膜表面的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.ADDLs降

3、低AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。免疫印跡結(jié)果顯示在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元，給予500nM的ADDLs處理，在3h、6h、24h均降低了AMPA受體GluA1/GluA2亞基細(xì)胞膜表面表達(dá)量，對(duì)GluA3亞基細(xì)胞膜表面表達(dá)沒(méi)有明顯影響，對(duì)GluA1-3亞基總蛋白表達(dá)量均沒(méi)有明顯影響。
　　2.ADDLs影響AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是通過(guò)調(diào)控GluA1亞基磷酸化實(shí)現(xiàn)的。對(duì)GluA1亞基磷酸化水平檢測(cè)結(jié)果顯示ADDLs(3h，6h，24h)顯著地降低了G

4、luA1亞基Ser-845以及Ser-831磷酸化水平。
　　3.激活D1R-PKA信號(hào)通路能干預(yù)ADDLs對(duì)AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。給予D1R激動(dòng)劑SKF81297(3μ M)可以上調(diào)ADDLs降低的AMPA受體GluA1/GluA2亞基細(xì)胞膜表面表達(dá)量以及GluA1亞基Ser-845磷酸化水平;D1R抑制劑SCH23390(10μM)可以抑制這種上調(diào)。
　　4.左旋千金藤啶堿l-SPD(3μM)對(duì)ADDLs降低AMP

5、A受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)具有保護(hù)作用。3μM l-SPD對(duì)ADDLs降低的AMPA受體GluA1/2亞基細(xì)胞膜表面表達(dá)量以及GluA1亞基Ser-845磷酸化水平有明顯恢復(fù)作用。
　　5.水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示APP小鼠和WT小鼠在記憶認(rèn)知方面存在明顯差異;細(xì)胞膜組分檢測(cè)結(jié)果顯示APP小鼠GluA1/GluA2亞基細(xì)胞膜表面表達(dá)量明顯降低;GluA1亞基磷酸化水平檢測(cè)結(jié)果顯示APP小鼠GluA1亞基Ser-845和Ser-831磷酸化水平均明

6、顯下調(diào)，腹腔注射l-SPD(10 mg/kg)，APP小鼠記憶認(rèn)知得以改善，GluA1/GluA2亞基細(xì)胞膜表面表達(dá)上調(diào)，GluA1亞基Ser-831和Ser-845磷酸化水平有一定恢復(fù)。
　　結(jié)論：1.ADDLs降低AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。2.ADDLs影響AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是通過(guò)調(diào)控GluA1亞基磷酸化實(shí)現(xiàn)的。3.激活D1R-PKA信號(hào)通路能干預(yù)ADDLs對(duì)AMPA受體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。4.l-SPD對(duì)ADDLs降低的AMPA受