玫瑰紅景天有效成分分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、玫瑰紅景天在中國(guó)和東歐國(guó)家是一種有名的傳統(tǒng)藥用植物，具有去疲勞、增強(qiáng)學(xué)習(xí)和記憶、興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高工作效率、耐缺氧、改善睡眠、預(yù)防高原病、抗癌等多種生理功能，目前是一種很受歡迎的藥食兩用“適應(yīng)原”植物。本文對(duì)該種植物中兩種主要的活性成分的提取分離純化工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，同時(shí)對(duì)其中的一些植物化學(xué)成分進(jìn)行了分離分析和結(jié)構(gòu)鑒定，建立了不同紅景天品種的指紋圖譜，為玫瑰紅景天資源的深度開(kāi)發(fā)和在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 1.在

2、單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用正交組合實(shí)驗(yàn)方法研究了三個(gè)主要提取因素對(duì)兩種主要成分(salidroside和rosavin)提取率的影響，得到因素與得率的回歸模型及三因素之間相互作用的響應(yīng)面圖。確定兩成分提取的最佳工藝條件為：乙醇濃度為70%(v/v)，料液比為1：10(w/v)，溫度為75℃，提取二次，每次提取時(shí)間1h。在最優(yōu)條件下，兩成分的提取率分別為0.80%和0.37%。同時(shí)研究了提取過(guò)程的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)，利用范德霍夫方程計(jì)算熱力學(xué)參

3、數(shù)(△H0，△S0和△G0)。研究結(jié)果表明兩種有效成分的浸出動(dòng)力學(xué)據(jù)符合Fick第二定律導(dǎo)出的浸出數(shù)學(xué)模型，模型擬合得到salidroside和rosavin內(nèi)擴(kuò)散傳質(zhì)系數(shù)分別為0.75×10-9(m2/s)和0.41×10-9(m2/s)；提取是一個(gè)吸熱熵增過(guò)程，同時(shí)也是一個(gè)自發(fā)過(guò)程。
　　 2.利用靜態(tài)吸附和動(dòng)態(tài)解吸實(shí)驗(yàn)，通過(guò)比較不同樹(shù)脂的吸附-解吸特性和分離選擇性選出最適合分離純化兩主要活性成分的非極性樹(shù)脂HPD-200，

4、兩成分在該樹(shù)脂上的平衡吸附行為符合Langmuir模型。同時(shí)研究了HPD-200樹(shù)脂上吸附動(dòng)力學(xué)和吸附熱力學(xué)，準(zhǔn)一級(jí)、準(zhǔn)二級(jí)反應(yīng)模型和膜擴(kuò)散傳質(zhì)模型用來(lái)擬合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果吸附動(dòng)力學(xué)可以用準(zhǔn)二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程來(lái)描述；吸附過(guò)程是受膜擴(kuò)散和內(nèi)擴(kuò)散步驟共同控制；吸附為放熱、自發(fā)過(guò)程，升高溫度不利于吸附反應(yīng)的進(jìn)行。此外，通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn)，確定了最佳分離純化工藝條件為：吸附：加樣濃度為1.89mg/mL(salidroside)和0.24mg/m

5、L(rosavin)，加樣量6.4mL(樣品溶液)/g(干樹(shù)脂)，柱床高度30cm，溫度25℃，流速1BV/h；解吸：溫度25℃，流速1BV/h，梯度洗脫的乙醇濃度和體積依次為：5%乙醇(2.5BV)、10%乙醇(2.5BV)、30%乙醇(2.5BV)、40%乙醇(2.5BV)、60%乙醇(2BV)。在最佳條件下，經(jīng)過(guò)兩次柱色譜分離，salidroside純度從粗提物中的5.57%達(dá)到91.21%，總回收率48.82%； rosavin

6、純度從0.69%增加為15.37%，總回收率46.52%。在最佳分離條件下，進(jìn)行了柱層析放大實(shí)驗(yàn)，結(jié)果salidroside和rosavin純度分別為90.36%和16.02%，總回收率分別為44.75%和52.02%。
　　 3.對(duì)放大分離得到的粗salidroside進(jìn)行結(jié)晶純化，得到結(jié)晶的最佳工藝條件為：結(jié)晶溶劑乙醇，結(jié)晶溶液的濃度20.5mg/mL(w/v)，結(jié)晶溫度15℃，結(jié)晶時(shí)間16h。經(jīng)過(guò)一步結(jié)晶，可以得到純度為9

7、9.18%的salidroside單體。對(duì)放大分離得到的粗rosavin先后經(jīng)過(guò)硅膠柱吸附和ADS-5C反相色譜方法來(lái)制備高純度rosavin單體。確定了兩步分離過(guò)程的最佳工藝條件。硅膠柱吸附色譜最佳工藝條件為：硅膠粒度200-300目，柱床高度25cm，加樣量50 mg(粗rosavin)/g(硅膠)，流動(dòng)相氯仿-甲醇(4:1，v/v)，流速1.5 mL/min，洗脫體積3BV。rosavin純度從16.02%增加到50.17%、回收

8、率為82.46%。ADS-5c反相色譜的最佳佳工藝條件為：加樣量16.7 mg(樣品)/g(樹(shù)脂)，洗脫劑50%乙醇，洗脫流速2BV/h，純度最高可以達(dá)到98.73%，回收率為43.29%。此外，結(jié)合硅膠柱層析和制備反相HPLC方法，對(duì)大孔樹(shù)脂分離salidroside和rosavin得到的其它餾分進(jìn)行分離純化，制備得到了19個(gè)單體化合物。
　　 4.通過(guò)UV、ESI-MS、1H-NMR13C-NMR、DEPT-135和二維譜(

9、1H-1H-COSY、HMQC、HMBC)等現(xiàn)代波譜分析方法，對(duì)其中15個(gè)單體化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，15個(gè)化合物分別鑒定為對(duì)-O-β-吡喃葡萄糖基-苯-2-丁酮，6-O-沒(méi)食子酰-紅景天苷，對(duì)-O-β-吡喃葡萄糖基-苯丙烯酸，7-甲氧基香豆素，苯乙基-6-O-β-葡萄糖苷，對(duì)羥基苯甲酸，紅景天苷，肉桂醇-6‘-O-α-吡喃阿拉伯糖基-O-β-吡喃葡萄彈苷，肉桂醇-6’-O-α-吡喃木糖-O-β-吡喃葡萄彈苷，肉桂醇-6’-O-α-呋喃阿

10、拉伯糖基-O-β-吡喃葡萄彈苷，肉桂醇-6-O-β-吡哺葡萄彈苷，對(duì)-羥基-苯乙醇，3，7-二甲基-2，6-二烯-1，4-二辛醇，3，7-二甲基-2，6-二烯-1，4-二辛醇-β-吡喃葡萄糖苷。其中，對(duì)-O-β-吡哺葡萄糖基-苯-2-丁酮，6，-O-沒(méi)食子酰-紅景天苷，對(duì)-O-β-吡喃葡萄糖基.苯丙烯酸、7-甲氧基香豆素為首次從玫瑰紅景天分到的化合物。
　　 5.通過(guò)最佳化提取、分離、分析條件，建立了一種HPLC方法同時(shí)測(cè)定紅景

11、天中六種“適應(yīng)原”活性成分，色譜條件為：色譜柱Purospher STAR C18；流動(dòng)相甲醇(A)+pH5.620mmol/L乙酸銨水溶液(B)；梯度程序40分鐘內(nèi)流動(dòng)相由10A/90B變?yōu)?00A/0B；流速1mL/min；柱溫30℃；檢測(cè)器二極管陣列(DAD)，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為276，250 and205nm。該方法有好的線性，令人滿意的精密度和回收率。然后新形成的方法用來(lái)分析不同品種不同產(chǎn)地的紅景天樣品，結(jié)果紅景天樣品中六種有效成

12、分的含量范圍分別為salidroside0.16-11.14 mg/g； tyrosol0-2.89 mg/g；rosarin0-1.01 mg/g； rosavin0-6.78 mg/g；rosin0-1.51 mg/g；rosiridin0-7.89 mg/g。六種成分的總量范圍為1.3-12.88mg/g。不同品種和產(chǎn)地的紅景天樣品所含六種適應(yīng)源活性成分的種類(lèi)和含量不同。新形成的方法也用來(lái)建立玫瑰紅景天、狹葉紅景天和高山紅景天的H