豬CD16及其介導(dǎo)PRRSV抗體依賴性增強(qiáng)作用研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)引起的一種急性傳染病，是目前嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的一種重要病毒病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。為了有效的控制該病的發(fā)生，眾多科學(xué)家從事疫苗的開(kāi)發(fā)和研究。然而，由于動(dòng)物豬體在感染

2、PRRSV后所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)和疾病的發(fā)展過(guò)程受多種因素的影響，致使疫苗的免疫效果不盡人意:其中，病毒感染的抗體依賴性增強(qiáng)作用（antibody-dependent enhancement，ADE）是關(guān)鍵影響因素之一。ADE即指機(jī)體的抗體水平在未達(dá)到中和抗體濃度時(shí)，可協(xié)助病毒進(jìn)入靶細(xì)胞，提高感染效率。
　　目前．ADE作用已在多個(gè)科屬的40多種病毒的感染中發(fā)現(xiàn)，如登革熱病毒、人免疫缺陷病毒、西尼羅河病毒等。與PRRSV相似的是這些病

3、毒多表現(xiàn)為嗜好在免疫細(xì)胞中繁殖，容易引發(fā)宿主的持續(xù)性感染。常規(guī)疫苗免疫防制這類具有ADE作用的病毒病時(shí)常常難以奏效，動(dòng)物免疫后，對(duì)該病毒的易感性反而會(huì)增加。因此，有必要利用病毒模型，探討ADE在這類病毒中的致病機(jī)制。
　　因此，為了更有效的防控PRRS的發(fā)生，本課題即從ADE角度出發(fā)，闡釋了PRRSV的致病機(jī)理。本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)亞中和活性的PRRSV特異性抗體存在時(shí)，PRRSV體外感染豬肺泡巨噬細(xì)胞(porcine alveolar

4、macrophages，PAMs)能力增強(qiáng)，即，亞中和活性的抗體可促進(jìn)病毒的感染和釋放。已有的報(bào)道表明，介導(dǎo)ADE效應(yīng)的細(xì)胞表面分子有三種Fcγ受體(FcγRs)，即:FcγRⅠ(CD64)、FeγRⅡ(CD32)和FcγRⅢ(CD16)。通過(guò)運(yùn)用熒光定量PCR方法，本研究發(fā)現(xiàn)CD16在PAMs的轉(zhuǎn)錄水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CD32和CD64;同時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)和Western blotting的結(jié)果也表明CD16在PAMs上高效表達(dá)。因此，本研究對(duì)

5、豬源CD16在PRRSV的ADE效應(yīng)中發(fā)揮的作用進(jìn)行研究。
　　首先，運(yùn)用抗CD16的單克隆抗體特異性阻斷PAMs表面的CD16，探究CD16在PRRSV的ADE效應(yīng)中是否發(fā)揮作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CD16功能被抗體特異性阻斷后，PRRSV亞中和活性的抗體引發(fā)的PRRSV的ADE效應(yīng)顯著降低，說(shuō)明PAMs表面的CD16能夠介導(dǎo)PRRSV的ADE。由于PAMs表面存在三種不同的FcγRs，為了特異性研究CD16，本研究在無(wú)FcγRs表達(dá)的

6、HEK293-T細(xì)胞和COS-7細(xì)胞上特異性表達(dá)豬源CD16，進(jìn)一步驗(yàn)證CD16介導(dǎo)的ADE效應(yīng)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRRSV-抗體免疫復(fù)合物可特異性吸附在HEK293-T/CD16細(xì)胞和COS-7/CD16細(xì)胞，進(jìn)而使得PRRSV內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞。最后，本研究還發(fā)現(xiàn)內(nèi)化的PRRSV可以在這些細(xì)胞內(nèi)發(fā)生復(fù)制，并釋放出具有活性的子代病毒。此外，本研究還證明豬源CD16的高效表達(dá)需要和Fc受體γ鏈的協(xié)同表達(dá)。
　　本研究對(duì)PRRSV的ADE效