豬CD16及其介導PRRSV抗體依賴性增強作用研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)引起的一種急性傳染病，是目前嚴重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的一種重要病毒病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。為了有效的控制該病的發(fā)生，眾多科學家從事疫苗的開發(fā)和研究。然而，由于動物豬體在感染

2、PRRSV后所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)和疾病的發(fā)展過程受多種因素的影響，致使疫苗的免疫效果不盡人意:其中，病毒感染的抗體依賴性增強作用（antibody-dependent enhancement，ADE）是關(guān)鍵影響因素之一。ADE即指機體的抗體水平在未達到中和抗體濃度時，可協(xié)助病毒進入靶細胞，提高感染效率。
　　目前．ADE作用已在多個科屬的40多種病毒的感染中發(fā)現(xiàn)，如登革熱病毒、人免疫缺陷病毒、西尼羅河病毒等。與PRRSV相似的是這些病

3、毒多表現(xiàn)為嗜好在免疫細胞中繁殖，容易引發(fā)宿主的持續(xù)性感染。常規(guī)疫苗免疫防制這類具有ADE作用的病毒病時常常難以奏效，動物免疫后，對該病毒的易感性反而會增加。因此，有必要利用病毒模型，探討ADE在這類病毒中的致病機制。
　　因此，為了更有效的防控PRRS的發(fā)生，本課題即從ADE角度出發(fā)，闡釋了PRRSV的致病機理。本研究發(fā)現(xiàn)當亞中和活性的PRRSV特異性抗體存在時，PRRSV體外感染豬肺泡巨噬細胞(porcine alveolar

4、macrophages，PAMs)能力增強，即，亞中和活性的抗體可促進病毒的感染和釋放。已有的報道表明，介導ADE效應(yīng)的細胞表面分子有三種Fcγ受體(FcγRs)，即:FcγRⅠ(CD64)、FeγRⅡ(CD32)和FcγRⅢ(CD16)。通過運用熒光定量PCR方法，本研究發(fā)現(xiàn)CD16在PAMs的轉(zhuǎn)錄水平遠遠高于CD32和CD64;同時，流式細胞術(shù)和Western blotting的結(jié)果也表明CD16在PAMs上高效表達。因此，本研究對

5、豬源CD16在PRRSV的ADE效應(yīng)中發(fā)揮的作用進行研究。
　　首先，運用抗CD16的單克隆抗體特異性阻斷PAMs表面的CD16，探究CD16在PRRSV的ADE效應(yīng)中是否發(fā)揮作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CD16功能被抗體特異性阻斷后，PRRSV亞中和活性的抗體引發(fā)的PRRSV的ADE效應(yīng)顯著降低，說明PAMs表面的CD16能夠介導PRRSV的ADE。由于PAMs表面存在三種不同的FcγRs，為了特異性研究CD16，本研究在無FcγRs表達的

6、HEK293-T細胞和COS-7細胞上特異性表達豬源CD16，進一步驗證CD16介導的ADE效應(yīng)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRRSV-抗體免疫復合物可特異性吸附在HEK293-T/CD16細胞和COS-7/CD16細胞，進而使得PRRSV內(nèi)化進入細胞。最后，本研究還發(fā)現(xiàn)內(nèi)化的PRRSV可以在這些細胞內(nèi)發(fā)生復制，并釋放出具有活性的子代病毒。此外，本研究還證明豬源CD16的高效表達需要和Fc受體γ鏈的協(xié)同表達。
　　本研究對PRRSV的ADE效