HBx在肝癌細(xì)胞p53依賴(lài)性和非依賴(lài)性凋亡通路中的作用靶點(diǎn).pdf

1、目的:該研究主要通過(guò)觀察HBx對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其對(duì)p53及p53上下游基因p21<'WAF1>及p14ARF的作用,探討HBx在依賴(lài)性及非依賴(lài)性p53凋亡通路中的作用靶點(diǎn),對(duì)進(jìn)一步闡明肝細(xì)胞癌的發(fā)生機(jī)制具有理論意義.方法:1、用HBx及HBx<,3'-40>(去除羧基末端40個(gè)氨基酸)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞SMMC-7721,用流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響,并用氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)-ELISA方法檢測(cè)HBx的反式激活作用,以及繪

2、制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)、平板克隆形成試驗(yàn)、裸鼠成瘤試驗(yàn)觀察HBx及HBx<,3'-40>對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.并用Western免疫印跡方法觀察不同肝癌細(xì)胞株的p14ARF、MDM2、p53、p21<'WAF1>蛋白的表達(dá)水平.2、通過(guò)構(gòu)建正、反義野生型p53與HBx、HBx<,3'-40>共轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞及將HBx轉(zhuǎn)染入不同p53狀態(tài)的肝癌細(xì)胞株,來(lái)觀察細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、含p53結(jié)合位點(diǎn)p21<'WAF1>啟動(dòng)子熒

3、光素酶活性并用Western免疫印跡方法比較p53、p21<'WAF1>表達(dá)水平的變化,分析HBx對(duì)p53及下游基因p21<'WAF1>的影響及其與肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響之間的關(guān)系.3、將HBx及p14ARF單轉(zhuǎn)染及共轉(zhuǎn)染含野生型p53但不表達(dá)p14ARF的肝癌細(xì)胞株HepG2,通過(guò)比較細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、含p53結(jié)合位點(diǎn)p21<'WAF1>啟動(dòng)子熒光素酶活性,并用Western免疫印跡方法比較p14ARF、MDM2、p53、p21<'WAF