骨髓干細(xì)胞在SD大鼠急性肝衰竭模型內(nèi)定向分化為肝樣細(xì)胞的機(jī)制研究.pdf

1、我國(guó)是肝炎、肝硬化及肝癌的高發(fā)國(guó)家,臨床上由此引發(fā)的終末期肝功能衰竭十分常見,目前最有效的治療手段是原位肝移植(OLT)。然而,由于供體的缺乏、免疫排斥和高額費(fèi)用等問題,原位肝移植的廣泛應(yīng)用受到了限制。由于肝細(xì)胞來源局限以及生物安命性等因素困擾,生物人工肝(BAL)的臨床應(yīng)用遠(yuǎn)未達(dá)到理論上的預(yù)期效果。作為治療肝功能衰竭的有效方法,自體骨髓干細(xì)胞移植治療越來越受到了人們的重視,但由于骨髓干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞定向分化的機(jī)制問題尚未闡明,使得骨髓

2、干細(xì)胞自體移植的臨床應(yīng)用遠(yuǎn)未達(dá)到人們的預(yù)期效果。對(duì)骨髓干細(xì)胞分化的微環(huán)境中蛋白分_了的研究有助于初步闡明骨髓干細(xì)胞體內(nèi)定向分化為肝樣細(xì)胞的分子機(jī)制,然而,目前對(duì)骨髓干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞定向分化的體內(nèi)微環(huán)境還缺乏深入的研究。
　　 第一章：SD大鼠急性藥物性肝衰竭模型的建立
　　 目的：建立SD大鼠急性藥物性肝衰竭模型。
　　 方法：選用SD大鼠24只,按隨機(jī)數(shù)字表法平均分為兩組:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,各12只。實(shí)驗(yàn)組SD大

3、鼠腹腔內(nèi)注射濃度為10g/L的D-氨基半乳糖注射液,劑量為0.12L/kg體重:對(duì)照組SD大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水,注射劑量為0.12L/kg體重。觀察兩組SD大鼠的一般情況,48小時(shí)后在全麻下分別取出兩組SD大鼠的同一葉肝臟,用作病理活檢及為下一步實(shí)驗(yàn)留取實(shí)驗(yàn)標(biāo)本；另心臟采血留取血清以備血清生化檢查(AST、ALT)。
　　 結(jié)果：1、成功建立SD大鼠急性藥物性肝衰竭模型。2、實(shí)驗(yàn)組SD大鼠給藥后活動(dòng)及對(duì)外界的反應(yīng)未立即出現(xiàn)明顯

4、的變化；給藥24小時(shí)后出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、行動(dòng)遲緩、飲食減少、尿色發(fā)黃:48小時(shí)后出現(xiàn)明顯的肝衰竭表現(xiàn)。對(duì)照組SD大鼠48小時(shí)內(nèi)未出現(xiàn)上述癥狀。3.給藥48小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組SD大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平顯著高于對(duì)照組SD大鼠的水平,有顯著件差異(P<0.001)。
　　 結(jié)論：SD大鼠是建立急性藥物性肝衰竭模型的理想動(dòng)物之一,也為我們進(jìn)一步開展下面的研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 第二章：建立實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組S

5、D大鼠肝臟蛋白質(zhì)的雙相電泳圖譜
　　 目的：建立實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟蛋白質(zhì)的雙相電泳圖譜,探討它們之間的差異。
　　 方法：①給藥48小時(shí)后,分別取出實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組每只SD大鼠同一葉肝臟組織,大小約為1cm3。②采用氯化銫梯度離心法去除實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟組織蛋白質(zhì),通過固相pH梯度(IPG)等電聚焦和梯度聚丙烯酰胺雙相電泳分離蛋白質(zhì),分析電泳圖像。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟組織電泳結(jié)果

6、存在顯著差異,這些蛋白質(zhì)在pH 3～10、相對(duì)分子質(zhì)量16000～250000范圍內(nèi)能被很好地分離；比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟蛋白質(zhì)的雙相電泳圖譜,可見27個(gè)上調(diào)或下調(diào)的蛋白質(zhì)差異點(diǎn)位。
　　 結(jié)論：成功獲得實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟蛋白質(zhì)的雙相電泳圖譜,并獲得27個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn)位。
　　 第三章：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟組織差異蛋白質(zhì)位點(diǎn)的質(zhì)譜分析
　　 目的：鑒定實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟組織之間的差異

7、表達(dá)蛋白位點(diǎn),明確這些蛋白質(zhì)的性質(zhì)。
　　 方法：從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SD大鼠肝臟組織雙相電泳圖譜的結(jié)果中選取差異顯著的27個(gè)蛋白質(zhì)位點(diǎn),使用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜儀和肽質(zhì)量指紋譜數(shù)據(jù)庫對(duì)這些差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行分析鑒定。
　　 結(jié)果：對(duì)27個(gè)差異顯著的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,根據(jù)檢測(cè)結(jié)果與肽質(zhì)量指紋譜數(shù)據(jù)庫中現(xiàn)有蛋白質(zhì)的匹配程度確定所檢測(cè)點(diǎn)位的蛋白質(zhì)屬性,再根據(jù)GPMAW 8.00 DEMO蛋白質(zhì)質(zhì)譜與序列分析軟件分析檢