共脅迫下玉米幼苗microRNA文庫的分析與驗(yàn)證.pdf

1、干旱、鹽和堿等非生物脅迫對(duì)植物的生長(zhǎng)、發(fā)育和產(chǎn)量影響很大。玉米(Zea mays L.)是一種重要的作物，目前對(duì)于玉米非生物脅迫的研究集中在單一脅迫，多個(gè)脅迫共處理的情況很少。microRNA(miRNA)是一種廣泛存在于植物中的非編碼小RNA，在非生物脅迫中扮演著重要的角色。對(duì)于干旱、鹽和堿共脅迫下玉米幼苗miRNA的研究目前還沒有報(bào)道。因此，本研究構(gòu)建2個(gè)miRNA文庫，篩選得到對(duì)干旱、鹽和堿共脅迫有顯著響應(yīng)的miRNA，通過進(jìn)一步

2、分析和驗(yàn)證，了解這些miRNA的功能。
　　對(duì)miRNA文庫的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，共得到31個(gè)miRNA家族的112個(gè)已知miRNA和10個(gè)新miRNA，其中58個(gè)miRNA表達(dá)差異顯著，17個(gè)miRNA上調(diào)表達(dá)，41個(gè)miRNA下調(diào)表達(dá)。對(duì)所有miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，共得到2224條靶基因。
　　使用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件對(duì)11個(gè)玉米候選內(nèi)參基因進(jìn)行穩(wěn)定性分析，發(fā)現(xiàn)microRNA總體比其

3、他候選內(nèi)參基因穩(wěn)定，選擇相對(duì)穩(wěn)定的zma-miR172和zma-miR171a為內(nèi)參基因進(jìn)行后續(xù)研究。隨機(jī)挑選11個(gè)miRNA進(jìn)行qRT-PCR的驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)除novel8與建庫結(jié)果不相符外，其余miRNA與文庫中的表達(dá)趨勢(shì)均一致。對(duì)上述11個(gè)miRNA中的9個(gè)已知miRNA進(jìn)行靶基因qRT-PCR的分析，發(fā)現(xiàn)在不同組織中，地下組織中的多數(shù)miRNA的響應(yīng)程度大于地上組織;在不同處理程度中miRNA有隨處理強(qiáng)度加大響應(yīng)加大的趨勢(shì);靶基因?qū)?/p>