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1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文單管PCR定量檢測Kras基因第12、13密碼子突變方法的建立及胰腺癌診斷價(jià)值評(píng)價(jià)姓名:唐旖旎申請學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):內(nèi)科學(xué)(消化系病)指導(dǎo)教師:李兆申201206第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文立一種能同時(shí)定量檢測Kras基因第12密碼子及13密碼子突變的PCR方法,并將其應(yīng)用于胰腺癌、慢性胰腺炎及正常人群中的外周血標(biāo)本檢測,評(píng)價(jià)其檢測效率以及鑒別診斷胰腺痛的價(jià)值。一、單管PCR定量檢測Kras基因第12、13密碼子突變方
2、法的建立’目的:建立單管PCR定量檢測Kras基因第12及13密碼子突變的方法,并檢驗(yàn)其靈敏度和特異度。方法:設(shè)計(jì)分別由FAM、VIC及NED標(biāo)記的KrasFAMTagmanMGB探針、K—rasVlCTagmanMGB探針及KrasNEDTagmanMGB探針。其中KrasFAMTagmanMGB探針為針對Kras基因第12密碼子六種突變類型的簡并探針,KrasVICTagmanMGB探針為針對Kras基因第13密碼子六種突變類型的簡
3、并探針,KrasNEDTagmanMGB探針為針對Kras基因第12、13密碼子野生型的探針;設(shè)計(jì)針對野生型Kras基因第12、13密碼子的PNA。通過制備野生型和Kras基因第12、13密碼子突變型的基因標(biāo)準(zhǔn)品,并進(jìn)行倍比稀釋,進(jìn)行絕對定量。在本實(shí)驗(yàn)室原PCR檢測方法的基礎(chǔ)上,進(jìn)行引物、MIX酶的優(yōu)化以及探針敏感性特異性和鑒別能力的檢測。結(jié)果:單管PCR定量檢測Kras基因第12及13密碼子突變的方法能夠分別有效地檢測Kras基因第1
4、2密碼子的突變類型及第13密碼子的突變類型,并且具有較高的檢測靈敏度。通過運(yùn)用此檢測方法對胰腺癌細(xì)胞株DNA進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果和測序結(jié)果完全吻合,由此證實(shí)此檢測方法具有良好的應(yīng)用性。結(jié)論:單管PCR定量檢測Kras基因第12及13密碼子突變方法可有效地檢測Kras基因第12及13密碼子突變,并且具有較高的靈敏度和特異性。二、胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人群外周血中K—ras基因第12及13密碼子突變的定量檢測及意義目的:通過對胰腺癌、慢性胰
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