電化學傳感技術(shù)檢測胰腺癌特異性標記物：K-ras基因和胰蛋白酶.pdf

1、胰腺癌（pancreatic cancer，PC）是一種常見的高致死率消化道惡性腫瘤。大多數(shù)病人在確診時已經(jīng)屬于中晚期胰腺癌，無法徹底治療。研究表明，胰腺癌患者K-ras基因突變率達到90％以上，而且80%的胰腺癌患者外周血中胰蛋白酶水平會明顯升高。因此，突變型K-ras基因和外周血中胰蛋白酶水平異常變化可以作為早期胰腺癌診斷的依據(jù)。
　　近年來，電化學生物傳感技術(shù)迅速發(fā)展，在基因診斷、腫瘤標志物檢測以及抗癌藥物篩選等方面發(fā)揮著越

2、來越重要的作用。本文結(jié)合胰腺癌的分子病理學特點，設(shè)計了用于早期胰腺癌診斷的電化學傳感器。主要內(nèi)容如下：
　　第一章構(gòu)建基于E.coliDNA連接酶和AuNPs的電化學DNA傳感器用于突變型K-ras基因檢測
　　本章主要構(gòu)建了一種基于E.coliDNA連接酶和AuNPs的電化學DNA傳感器，以RuHe x為信號指示體系，通過計時庫侖分析法檢測突變型K-ras基因。利用SEM和UV-VIS對合成的AuNPs和納米金探針進行表征

3、，采用EIS技術(shù)表征傳感器制作過程。在最佳實驗條件下，測得突變型K-ras基因的線性范圍為0.1 pM~1000pM，LOD為10fM，并能在含有野生型K-ras基因的雜合體系中準確檢測突變型K-ras基因。
　　第二章構(gòu)建基于DNA聚合酶Ⅰ的電化學DNA傳感器用于突變型K-ras基因檢測
　　本章主要設(shè)計了一種基于DN A聚合酶Ⅰ的電化學 DN A傳感器，通過基因雜交、聚合酶Ⅰ的鏈接作用和生物素-親和素系統(tǒng)將HRP固定在修

4、飾電極表面，在TM B檢測體系中利用電流時間曲線技術(shù)精確測定突變型K-ras基因。主要通過EIS對傳感器制作過程進行表征。在最佳實驗條件下，測得突變型K-ras基因的線性范圍為0.001 pM~100pM，LOD為0.5fM，優(yōu)于目前用于K-ras基因測定的其他方法。本方法實現(xiàn)了在含有野生型K-ras基因的雜合體系中準確測定突變型K-ras基因，為臨床檢測突變型K-ras基因提供了一種新方法。
　　第三章構(gòu)建基于聚硫堇-AuNPs

5、復合材料為信號指示的免標記型電化學免疫傳感器用于胰蛋白酶檢測
　　本章主要建立了一種以聚硫堇-AuNPs復合材料（PTh-AuNPs）為信號指示的免標記型電化學免疫傳感器，在 pH5.5的 PBS中，根據(jù)抗原—抗體反應(yīng)固定抗原，通過差分脈沖伏安法精確測定胰蛋白酶。采用UV-VIS、TEM和XRD對PTh-AuNPs復合材料進行表征，以及通過AFM對傳感器制備過程進行表征。在最佳實驗條件下，測得胰蛋白酶的線性范圍為0.02ng/ml