血脂異常在動(dòng)脈粥樣硬化血管外膜炎癥中作用的研究.pdf

1、目的：高脂飲食建立As模型，探討：①血脂異常與血管外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、外膜成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化以及核因子K Bp65(Nuclear factor Kappa B．NF-KappaB)活性的關(guān)系；②外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)與As病變程度的關(guān)系；③成纖維細(xì)胞NF-K Bp65活性與其表型轉(zhuǎn)化的關(guān)系；④氟伐他汀對(duì)As外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和NF-K Bp65活性的影響。 結(jié)果：(1)高脂飲食組及氟伐他汀組總膽固醇(Total ch

2、olesterol，TC)及低密度脂蛋白(low-dentity lipoprotein，LDL)較正常對(duì)照組均明顯增高(P<0.01)，但氟伐他汀組與高脂飲食組比較明顯降低(P<0.01)：(2)高脂飲食組及氟伐他汀組動(dòng)脈內(nèi)膜均較正常對(duì)照組明顯增厚(P<0.01)，有明顯粥樣斑塊形成，但氟伐他汀組與高脂飲食組比較，內(nèi)膜厚度及斑塊面積明顯減少(P<0.01)；(3)正常對(duì)照組血管外膜幾乎無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，血管外膜成纖維細(xì)胞也幾乎無(wú)α-SM

3、actin表達(dá)及NF-KBp65活性：高脂飲食組及氟伐他汀組血管外膜均有明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，成纖維細(xì)胞NF-KBp65活性及α-SMactin表達(dá)增加，但氟伐他汀組較高脂飲食組外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞NF-KBp65活性及α-SMactin的表達(dá)均明顯減少(P<0.05)；(4)高脂飲食組及氟伐他汀組TC及LDL與主動(dòng)脈外膜炎癥細(xì)胞數(shù)、NF-κBp65活性及α-SMaetin表達(dá)均皇正相關(guān)，以LDL相關(guān)性較好(高脂組LDL與外膜炎癥細(xì)

4、胞數(shù)及NF-κBp65活性的相關(guān)系數(shù)均為r=0.683，P<0.05，LDL與α-SMaetin表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為r=0.708，P<0.05；他汀組LDL與外膜炎癥細(xì)胞數(shù)及NF-κBp65活性的相關(guān)系數(shù)分別為r=0.775，P<0.01，r=0.726，P<0.05；LDL與α-SMactin表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為r=0.769，P<0.01；)，HDL與外膜炎癥細(xì)胞數(shù)、NF-κB活性及α-SMactin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；TG無(wú)明顯相關(guān)性(P>0

5、.05)；(5)高脂飲食組和氟伐他汀組外膜成纖維細(xì)胞NF-κBp65活性與α-SMactin的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為r=0.633及0.649，p<0.05)，外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)與斑塊面積呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為r=0.648及0.663，p<0.05)。結(jié)論：(1)實(shí)驗(yàn)性高脂飲食建立As模型成功，高脂飲食可以引起血脂明顯異常。(2)HC尤其是LDL升高與As血管外膜炎癥、外膜成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及NF-κBp65的活性有關(guān)；(3

6、)血管外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)與As病變程度呈正相關(guān)；(4)外膜成纖維細(xì)胞NF-κBp65的活性與其表型轉(zhuǎn)化呈正相關(guān)；(5)氟伐他汀能抑制As血管外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及外膜成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和NF-κB的活性。 論文Ⅱ氧化低密度脂蛋白對(duì)成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、增殖及炎癥因子合成的影響背景：成纖維細(xì)胞是血管外膜的主要細(xì)胞成分，在正常狀態(tài)下，血管外膜成纖維細(xì)胞(Adventitial fibroblasts，AF)處于相對(duì)"靜止"狀態(tài)，但某些病理狀

7、態(tài)下，"靜止"的AF可以轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞(Myofibroblasts，MF)，MF是具有平滑肌細(xì)胞特點(diǎn)的成纖維細(xì)胞，能分泌多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，參入免疫和炎癥反應(yīng)。我們?cè)趧?dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：As的血管外膜成纖維細(xì)胞被激活、轉(zhuǎn)化為MF，且AF的轉(zhuǎn)化與HC尤其是LDI。升高呈正相關(guān)，但LD[.能否引起成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、增殖及炎癥因子合成目前國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)報(bào)道，為此，我們應(yīng)用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)直接作用于培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，觀察ox

8、-LDI。對(duì)成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化、增殖及炎癥因子合成的影響。 目的：用含有OX-LDL的培養(yǎng)基孵育人胚肺成纖維細(xì)胞(HEFs)，并用IKB-a磷酸化抑制劑BAY11-7082進(jìn)行干預(yù)，觀察成纖維細(xì)胞的表型變化、增殖及炎癥因子合成的變化，以探討OX-LDL對(duì)成纖維細(xì)胞的影響及其機(jī)制。 結(jié)果：1、細(xì)胞特性鑒定顯示：培養(yǎng)的細(xì)胞特異性Vimentin抗原染色陽(yáng)性，α-SMactin陰性；2、MTT比色顯示：50μg/ml

9、及100μg/ml的OX-LDL組細(xì)胞增殖率均較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)，差異有顯著性(P<0.05)，BAY11-7082組細(xì)胞增殖率較正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：不同濃度的OX-LDL均能使進(jìn)入G<,1>期或S期的細(xì)胞增加，以100μg/ml OX-LDL組進(jìn)入S期的成纖維細(xì)胞最多，與正常組比較有顯著性差異(P<0.05)，BAY11-7082組細(xì)胞周期與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；

10、4、正常對(duì)照組和BAY11-7082組HEFs幾乎無(wú)NF-κBp65的活性及α-SMactin表達(dá)，TGF-β<,1>的表達(dá)微弱，原位雜交檢測(cè)顯示：正常對(duì)照組幾乎無(wú)NF-κBp65mRNA表達(dá)，而B(niǎo)AY11-7082組NF-κBp65mRNA表達(dá)明顯，兩組細(xì)胞TGF-β<,1>mRNA表達(dá)微弱；OX-LDL各組均有α-SMactin、TGF-β<,1>表達(dá)及NF-κBp65的活性，與原位雜交檢測(cè)顯示的NF-κBp65mRNA及TGF-β

11、<,1>mRNA表達(dá)增加一致，且呈濃度依賴性，各組間有顯著性差異(P<0.05)；5、正常對(duì)照組和BAY11-7082組無(wú)MCP-1及MCP-lmRNA的表達(dá)，也無(wú)IL-1α、IL-6的分泌；ox-LDL各組均能刺激HEFs表達(dá)MCP-1及MCP-lmRNA并分泌IL-1、IL-6，且呈濃度依賴性，各組間差異具有顯著性(P<0.05)。IL-lα、IL-6的含量均與MCP-1的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.932，0.834(

12、P<0.01)．。結(jié)論：(1)ox-LDL能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，且呈濃度依賴性；(2)不同濃度的ox-LDL均能影響成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期，使細(xì)胞的增殖增加；(3)ox-LDL能濃度依賴性的誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞表達(dá)炎癥因子MCP-1及IL-1α、IL-6：(4)ox-LDL誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞合成IL-1α、IL-6可能與MCP-1的表達(dá)增加有關(guān)；(5)ox-LDL可能通過(guò)NF-KB通路誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化、增殖和炎癥因子的合成。 氟

13、伐他汀對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞遷移及炎癥因子合成的干預(yù)作用背景：大量臨床實(shí)驗(yàn)已證實(shí)3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑(3-Hydroxy-3-methyglutary coenzyme A reductase inhibitors，HMCI)能明顯減少冠心病的臨床事件，其降脂作用已眾所周知，而其非降脂作用尤其是抗炎作用是近幾年的研究熱點(diǎn)，但大多數(shù)研究主要是針對(duì)HMCI對(duì)血管內(nèi)膜炎癥的影響，有關(guān)HMCI對(duì)As血管外膜影響

14、的研究目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。我們?cè)谇捌趧?dòng)物實(shí)驗(yàn)中觀察到HMCI類藥物．氟伐他汀能明顯抑制As的血管外膜炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及外膜成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化和NF-KBp65的活性，說(shuō)明氟伐他汀具有抗As血管外膜炎癥、抑制成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化，改善血管重塑的作用，但這種作用是否獨(dú)立于降脂作用之外尚不清楚，為此，我們?cè)贖EFs的培養(yǎng)基中直接加入不同濃度的氟伐他汀及ox-LDL，觀察對(duì)HEFs的遷移和炎癥因子合成的影響。 目的：將HEFs在含有氟伐他

15、汀及ox-LDL的培養(yǎng)基中孵育，觀察成纖維細(xì)胞的遷移及炎癥因子合成的變化，以探討氟伐他汀對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞變化的抑制作用。 結(jié)果：(1)細(xì)胞特性鑒定同第二部分；(2)各濃度的氟伐他汀對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞遷移均有抑制作用，且呈濃度依賴性，各組間有顯著性差異，(F=23.947，P<0.01)；(3)氟伐他汀組可劑量依賴性抑制Ox-LDL誘導(dǎo)的HEFs的MCP-1表達(dá)和IL-1α、IL-6的合成，但各組仍較正常

16、對(duì)照組增加，差異有顯著性(P<0.05)；(4)IL-1α、IL-6的合成均與MCP-1的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為r=0.947，P<0.01及0.757，P<0.05) 結(jié)論：(1)氟伐他汀在降脂作用外能劑量依賴性的抑制ox-LDL誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞的遷移；(2)氟伐他汀降脂作用外能劑量依賴性抑制ox-LDL誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞MCP-1的表達(dá)及IL-1α和IL-6的合成；(3)氟伐他汀對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞IL-1