不同分子類(lèi)型乳腺癌Bcl-2蛋白表達(dá)的意義.pdf

1、目的:乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅婦女身心健康，全世界每年約有130多萬(wàn)女性患乳腺癌，約有50萬(wàn)人死于本病。2014中國(guó)腫瘤登記年報(bào)顯示:乳腺癌已在女性惡性腫瘤發(fā)病率中占第一位，據(jù)推測(cè):到2015年中國(guó)乳腺癌發(fā)病率在城市女性約為53.87/10萬(wàn)，農(nóng)村女性約為40.14/10萬(wàn)。在我國(guó)，受經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重、精神壓力增大、飲食西方化、環(huán)境污染、高雌激素暴露及孕齡期生育減少等因素的影響，近年來(lái)乳腺癌發(fā)病率逐年增長(zhǎng)，成為城市中死亡率增長(zhǎng)

2、最快的癌癥，發(fā)病年齡年輕化趨勢(shì)顯著，已經(jīng)成為城市女性的第一殺手。乳腺癌的治療主要是外科手術(shù)結(jié)合放療、化療、內(nèi)分泌治療和靶向藥物治療，其中，化療在乳腺癌綜合治療中必不可少，是最重要、最常用的全身治療。早期的乳腺癌組織學(xué)分型能夠較好的協(xié)助醫(yī)生較好的判斷腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為、指導(dǎo)外科手術(shù)方式及切除范圍、以及判斷患者預(yù)后情況，在很大程度上推動(dòng)了乳腺癌治療，特別是外科治療的進(jìn)步。以細(xì)胞毒性為代表的傳統(tǒng)化療藥物能夠殺滅正在增殖的乳腺癌細(xì)胞，

3、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，有效減小機(jī)體內(nèi)殘余腫瘤負(fù)荷，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，在乳腺癌治療中發(fā)揮著不可缺少的作用。但這類(lèi)藥物殺傷腫瘤細(xì)胞特異性較差，對(duì)機(jī)體的毒副作用較大，常會(huì)使患者生存質(zhì)量下降，臨床應(yīng)用受到很大程度限制。伴隨著人們對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制了解的深入，分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)、熒光原位雜交(fluorescencein situ hybridization, FISH)等技術(shù)在臨床病

4、理中的推廣，腫瘤特異分子變化檢出已成為病理的常規(guī)工作。針對(duì)某些腫瘤特定分子變化的個(gè)體化治療已成為腫瘤治療的發(fā)展方向，乳腺癌也不例外。個(gè)體化治療的核心是分子靶向治療，分子靶向治療藥物治療的基礎(chǔ)是利用分子病理分型明確每一個(gè)腫瘤的特異性分子變異。目前常用于乳腺癌靶向治療的藥物主要是雌激素抑制劑(三苯氧胺，TAM)及HER2單克降抗體藥物的(赫賽汀，Herceptin)。因此，乳腺癌分子分型也就主要依據(jù)癌細(xì)胞的雌激素受體(estrogen re

5、ceptor，ER)、孕激素受體(progesterone，receptor，PR)及表皮生長(zhǎng)因子受體2(epidermal growth factor receptor2，EGFR2，HER2)的表達(dá)狀況實(shí)行。根據(jù)ER、PR及HER2的免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果，乳腺癌在分子水平上被簡(jiǎn)易分為4種分子亞型，即管腔上皮A型(Luminal subtype A，ER+/PR+、HER2-)、管腔上皮B型(Luminal subtype B， ER

6、+/PR+、HER2+)、HER2過(guò)表達(dá)型(HER2 over-expression subtype，ER-、PR-、HER2+)]、三陰乳腺癌(ER-、PR-、HER2-)。近年來(lái)臨床上依據(jù)這種乳腺癌分子分型，選用針對(duì)性較強(qiáng)的分子靶向藥物進(jìn)行個(gè)體化分子靶向治療，不但延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間，同時(shí)很大程度提高了患者的生活質(zhì)量。然而，在臨床應(yīng)用中人們發(fā)現(xiàn)這種分子分型指導(dǎo)治療時(shí)也會(huì)出現(xiàn)腫瘤標(biāo)記物表達(dá)相同的乳腺癌患者在接受相同分子靶向藥物治療后，對(duì)

7、治療的反應(yīng)及預(yù)后卻存在明顯差異。因此，在現(xiàn)有乳腺癌分子分型基礎(chǔ)上，尋找新的分子標(biāo)記物來(lái)完善現(xiàn)有的分子分型很有必要。目前用于分子分型的ER、PR、HER2標(biāo)記蛋白均為細(xì)胞增殖相關(guān)受體，它們的表達(dá)狀況能夠較好的反應(yīng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)外界增生刺激反應(yīng)的能力以及腫瘤細(xì)胞的增殖狀況。然而，腫瘤增長(zhǎng)除與細(xì)胞增殖能力有關(guān)以外，也受細(xì)胞死亡的影響。增殖與死亡的平衡決定腫瘤是否會(huì)增大。將表達(dá)腫瘤細(xì)胞死亡的指標(biāo)加入到現(xiàn)有分子病理分型評(píng)價(jià)體系，可能會(huì)使現(xiàn)有乳腺癌分

8、子病理分型體系更加完善，對(duì)臨床治療的指導(dǎo)作用也可能更具有針對(duì)性。
　　以凋亡為主要形態(tài)學(xué)表現(xiàn)的細(xì)胞程序性死亡是機(jī)體調(diào)整正常組織細(xì)胞數(shù)量的重要機(jī)制，調(diào)控機(jī)制主要是通過(guò)限制細(xì)胞存活時(shí)間發(fā)揮生物效應(yīng)。腫瘤細(xì)胞的凋亡易感性受多種凋亡基因表達(dá)產(chǎn)物影響。當(dāng)?shù)蛲龅恼{(diào)控環(huán)節(jié)受到抑制，一些DNA受損細(xì)胞的生存時(shí)間延長(zhǎng)，持續(xù)增殖，進(jìn)而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，形成腫瘤。Bcl-2是公認(rèn)的凋亡抑制基因，在細(xì)胞生殖過(guò)程中發(fā)揮著增殖促進(jìn)子的作用，可阻斷多種原因?qū)е碌募?xì)

9、胞凋亡過(guò)程。Bcl-2是原癌基因的編碼產(chǎn)物，屬線粒體膜整合蛋白，分子量為26kDa，在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中起著促進(jìn)子的作用。研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2基因位于18q21上，定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和連續(xù)的核周膜，其編碼蛋白在多種細(xì)胞的激活和發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著作用。Bcl-2基因家族按功能分為兩類(lèi)，一類(lèi)具有促進(jìn)細(xì)胞調(diào)亡的作用，如Bcl-2、bcl-X1、Bcl-W、Ced-9等，另一類(lèi)具有抑制細(xì)胞調(diào)亡的作用包括bad、bax、Mcl-1蛋白等。Bcl-2表達(dá)

10、受雌激素調(diào)節(jié)，作為抗凋亡基因應(yīng)該在乳腺癌發(fā)生、演進(jìn)過(guò)程中發(fā)揮作用。Bcl-2通過(guò)基因變異被異常激活，其編碼蛋白表達(dá)隨之增強(qiáng)，參與線粒體內(nèi)凋亡機(jī)制，致使細(xì)胞存活時(shí)間延長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白在淋巴造血系統(tǒng)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、胃癌、腎癌及乳腺癌細(xì)胞均有過(guò)表達(dá)。Bcl-2在乳腺癌的發(fā)生、演進(jìn)過(guò)程中發(fā)揮一定的作用，檢測(cè)BCL-2蛋白表達(dá)可能對(duì)現(xiàn)有乳腺癌分子分型有一定的補(bǔ)充。本研究檢測(cè)乳腺癌抗細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，分析其表達(dá)與患者生存狀況、臨

11、床病理參數(shù)以及與現(xiàn)有分子分型中的ER、PR、HER2的表達(dá)的相互關(guān)系，探討檢測(cè)Bcl-2蛋白表達(dá)對(duì)乳腺癌分子病理分型的補(bǔ)充作用。
　　方法:本研究選取2001年1月至2005年12月10年期間于遼寧省大連市第三人民醫(yī)院手術(shù)切除乳腺癌標(biāo)本264例，所有患者術(shù)前均未做過(guò)腫瘤方面的治療，記錄患者年齡:≤57歲198例、＞57歲66例，最小年齡為24歲，最大年齡為78歲;腫瘤大小、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、組織學(xué)類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、神經(jīng)及脈管

12、侵犯情況等臨床病理參數(shù)，同時(shí)，對(duì)其術(shù)后接受正規(guī)治療的41例患者跟蹤10年，記錄患者存活情況，。通過(guò)免疫組織化SP方法檢測(cè)了ER、PR、HER2、Bcl-2蛋白的表達(dá)情況，根據(jù)前三者的表達(dá)情況進(jìn)行分子分型類(lèi)Luminal A型64例、類(lèi)Luminal B型147例、HER2+型29例及類(lèi)三陰型27例，乳腺癌中Bcl-2蛋白的表達(dá)情況，探討分析其在乳腺癌中的表達(dá)及其相互關(guān)系及差異。用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各型的臨床特征進(jìn)行分析，對(duì)計(jì)數(shù)資

13、料采用x2檢驗(yàn)方法，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　一、乳腺癌臨床病理參數(shù)與Bcl-2蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　在264例乳腺癌中，Bcl-2的陽(yáng)性率為69.7％(184/264)。Bcl-2的陽(yáng)性率:在≤57歲組與＞57歲組分別為70.2％(139/198)與68.2％(45/66)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.757); TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期與Ⅳ期分別為71.2％(42/59)、66.9％(83/

14、124)、71.8％(56/78)與0.00％(3/3)，各組間均無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系(P=0.577);腫瘤大小T1組、T2組、T3組與T4組分別為74％(77/104)、68.5％(76/108)、54.1％(20/37)與66.7％(10/15)，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著(P=0.178);淋巴結(jié)N0、N1、N2與N3分別為66.4％(77/116)、72.3％(60/83)、69.7％(23/33)與68.8％(22/32)，三者差異不顯著(

15、P=0.781);組織學(xué)分級(jí)1級(jí)組、2級(jí)組、3級(jí)組分別為73.3％(22/30)、77.7％(101/130)與58.7％(61/104)，1級(jí)和2級(jí)的陽(yáng)性率明顯高于3級(jí)，各組間差異顯著(P=0.006);組織學(xué)類(lèi)型浸潤(rùn)性小葉癌、原位癌、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌與其它類(lèi)型浸潤(rùn)性癌分別為84.3％(27/32)、80％(4/5)、71.2％(141/198)與41.14％(12/29)，浸潤(rùn)性小葉癌最高，其他類(lèi)型浸潤(rùn)性癌最低，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.

16、002);脈管無(wú)侵犯者與有侵犯者分別為72.9％(78/107)與67.5％(106/157)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.350);神經(jīng)無(wú)侵犯者與有侵犯者分別為69.9％(128/183)與69.1％(56/81)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.895)。
　　二、不同分子病理分型乳腺癌的Bcl-2蛋白表達(dá)
　　在264例乳腺癌患者中，Bcl-2蛋白陽(yáng)性率在Luminal A型(ER+/PR+，HER2-)、Lumina

17、l B型(ER+/PR+,HER2+)、HER2+型(ER-/PR-,HER2+)與三陰型（ER-、PR-和HER2-）分別為68.7％(44/64)、81.6％(120/147)、37.9％(11/29)與33.3％(9/27)，各組間差異顯著(P=0.000)。Bcl-2蛋白陽(yáng)性率在Luminal B型和Luminal A型顯著高于HER2+型和三陰型。
　　三、乳腺癌Bcl-2表達(dá)與患者10年生存關(guān)系
　　在264例乳

18、腺癌患者中隨訪成功41例，Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率為85.4％(35/41)，其中生存組與死亡組的Bcl-2陽(yáng)性率分別為91.7％(22/24)與76.5％(13/17)，生存組高于死亡組，但兩組統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著(P=0.084)。
　　四、乳腺癌臨床病理參數(shù)與乳腺癌分子分型的關(guān)系
　　在264例乳腺癌中，Luminal A型64例、Luminal B型144例、HER2+型29例及類(lèi)三陰型27例。LuminalA型、Lumin

19、al B型、HER2+型及類(lèi)三陰型:57歲以下組分別為71.9％(46/64)、75.7％(109/144)、75.9％(22/29)及77.8％(21/27)，57歲以上組分別為28.1％(18/64)、24.3％(35/144)、24.1％(7/29)及22.2％(6/27)，各組間無(wú)明顯差別(P=0.920); TNM分期Ⅰ期分別為34.4％(22/64)、19.4％(28/144)、13.8％(4/29)及18.5％(5/27)

20、，Ⅱ期分別為39.1％(25/64)、49.3％(71/144)、48.3％(14/29)及51.9％(14/27)，Ⅲ期分別為25.0％(16/64)、29.9％(43/144)、37.9％(11/29)及29.6％(8/27)，Ⅳ期分別為1.6％(1/64)、1.4％(2/144)、0.0％(0/29)及0.0％(0/27);腫瘤大小，T1中分別為48.4％(31/64)、36.1％(52/144)、27.6％(8/29)及25.9

21、％(7/27)，T2中分別為28.1％(18/64)、45.8％(66/144)例、37.9％(11/29)及48.1％(13/27)，T3中分別為15.6％(10/64)、11.1％(16/144)、17.2％(5/29)、18.5％(5/27)，T4中分別為0.078％(5/64)、0.028％(4/144)、0.172％(5/29)及0.074％(2/27)，T1組的Luminal A型所占比例最高，在T4組中Luminal B型

22、所占比例最少，各組間差異顯著(P=0.035);淋巴結(jié)N0組分別為56.2％(36/64)、39.6％(57/144)、31.0％(9/29)、51.9％(14/27)，N1組分別為23.4％(15/64)、34.7％(50/144)、37.9％(11/29)及25.9％(7/27)，N2組分別為7.8％(5/64)、13.2％(19/144)、17.2％(5/29)及14.8％(4/27)例，N3組分別為12.5％(8/64)、12.

23、5％(18/144)、13.8％(4/29)及7.4％(2/27)例，各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.422);組織學(xué)分級(jí)1級(jí)組分別為15.6％(10/64)、9.7％(14/144)、6.9％(2/29)及14.8％(4/27)例，2級(jí)組分別為50.0％(32/64、56.2％(81/64)、34.5％(10/29)及25.9％(7/27)例，3級(jí)組分別為34.4％(22/64)、34.0％(49/144)、58.6％(17/29)及

24、59.2％(16/27)，在3級(jí)中類(lèi)basal-like型所占比例最高，在1級(jí)中HER2+型所占比例最低，各組間差異顯著(P=0.022);組織學(xué)類(lèi)型中浸潤(rùn)性小葉癌分別為6.3％(4/64)、16.0％(23/144)、13.8％(4/29)及3.7％(1/27)例，原位癌分別為6.3％(4/64)、0.0％(0/144)、0.0％(0/29)及3.7％(1/27)例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌分別為70.3％(45/64)、77.1％(111/14

25、4)、75.9％(22/29)及74.1％(20/27)，其它類(lèi)型浸潤(rùn)性癌17.2％(11/64)、6.9％(10/144)、10.3％(3/29)及18.5％(5/27)，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中HER2+型陽(yáng)性率最高、Luminal B型最少，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.023);脈管無(wú)侵犯組分別為53.1％(34/64)、38.2％(55/144)、17.2％(5/29)及48.1％(13/27)，脈管有侵犯組分別為46.9％(30/34)、6

26、1.8％(89/144)、82.8％(24/29)及51.9％(14/27)，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著(P=0.08);神經(jīng)無(wú)侵犯者分別為78.1％(50/64)、69.4％(100/144)、51.7％(15/29)及66.7％(18/27)，神經(jīng)有侵犯者分別為21.9％(14/64)、30.6％(44/144)、48.3％(14/29)及33.3％(9/27)例，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著(P=0.084)。
　　五、乳腺癌Bcl-2蛋白與ER

27、、PR、HER2表達(dá)的關(guān)系
　　在264例乳腺癌中，Bcl-2的陽(yáng)性率為69.7％(184/264)。Bcl-2的陽(yáng)性率:在ER陰性組與陽(yáng)性組分別為36.2％(25/69)與81.5％(159/195)，陽(yáng)性組明顯高于陰性組(P=0.000);在PR陰性與陽(yáng)性組分別為37.3％(28/75)與82.5％(156/189)，陽(yáng)性組明顯高于陰性組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.000);在HER2陰性與陽(yáng)性組分別為58.2％(53/91)與

28、75.7％(131/173)，陽(yáng)性組明顯高于陰性組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.003);在ER+ PR+、ER+ PR-、ER-PR+、ER-PR-分組中分別為:85.8％(151/16)、50.0％(8/19)、38.5％(5/13)、35.7％(20/56)，本研究中ER+ PR+組Bcl-2陽(yáng)性率最高，ER+ PR-與ER-PR+次之，ER-PR-組Bcl-2陽(yáng)性率最低，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.000);在ER+ HER2+、ER+

29、 HER2-、ER-HER2+、ER-HER2-分組中分別為:86.7％(117/135)、70.0％(42/60)、36.8％(14/38)、35.5％(11/31)，研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2的陽(yáng)性率在ER+ HER2+組最高，ER+ HER2-與ER-HER2+次之，ER-HER2-組最低，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.000);在PR+ HER2+、PR+HER2-、PR-HER2+、PR-HER2-分組中分別為:86.6％(116/134)

30、、72.7％(40/55)、38.5％(15/39)、36.1％(13/36), Bcl-2陽(yáng)性率:PR+ HER2+組最高，PR+ HER2-與PR-HER2+次之，PR-HER2-組最低，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000)。
　　結(jié)論:
　　1、細(xì)胞凋亡抑制LuminalA型、Luminal B型乳腺癌，Bcl-2過(guò)表達(dá)造成的凋亡減少可能對(duì)Luminal型乳腺癌的發(fā)生、演進(jìn)影響更大。
　　2、以雌激素受體(ER