杜仲總木脂素及松脂醇二葡萄糖苷的提取純化研究.pdf

1、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是我國名貴滋補(bǔ)藥材。杜仲中含有木脂素類、環(huán)烯醚萜類及黃酮類等多種化學(xué)成分,具有調(diào)節(jié)血壓血脂、抑制腫瘤細(xì)胞等藥理作用。杜仲總木脂素有效部位具有明顯的舒張血管作用,其中,松脂醇二葡萄糖苷(Pinoresinol Diglucoside,PDG)屬于雙環(huán)氧木脂素類,是杜仲降血壓的主要成分。
　　本論文通過研究杜仲樣品采集后的干燥方法及不同采收期的杜仲皮中的總木脂素及PDG的含量變化,

2、確定了較優(yōu)的干燥方法及杜仲皮的最佳采收期。進(jìn)而,對杜仲總木脂素及PDG的提取純化工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。研究內(nèi)容結(jié)果如下:
　　(1)研究了杜仲總木脂素、PDG、綠原酸(Chlorogenic Acid,CA)、京尼平苷酸(Geniposidic Acid,GPA)、總黃酮和桃葉珊瑚苷(Aucubin,AU)等多種活性成分的檢測方法。具體如下:變色酸比色法測定杜仲總木脂素,檢測波長525nm。高效液相色譜檢測方法定量檢測杜仲PDG,

3、檢測條件為:色譜柱為Dimamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm);進(jìn)樣體積為20μL;溫度為25℃;流動(dòng)相:V(乙腈)︰V(0.05％磷酸)為15︰85;檢測波長λ為228nm;流速1.0mL/min。薄層層析法定性檢測杜仲PDG,展開劑:氯仿︰甲醇(V︰V)為7:3。顯色劑:10%的變色酸,濃硫酸。高效液相色譜法測定綠原酸、京尼平苷酸。硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測定總黃酮和對二甲氨基苯甲醛顯色法測定桃葉珊瑚苷。
　

4、　(2)研究了杜仲皮及葉鮮樣的干燥方法及不同采收期的杜仲皮中總木脂素和PDG的含量變化情況。分別采用5種方法對杜仲皮和葉進(jìn)行干燥,并研究這些方法對杜仲皮及葉中的PDG、綠原酸、京尼平苷酸、總黃酮和桃葉珊瑚苷含量的影響。結(jié)果表明:微波殺青后50℃烘干處理杜仲皮及葉能夠有效的減少活性成分的損失,是一種比較好的干燥方法。經(jīng)過此法處理后,杜仲葉中綠原酸、總黃酮和桃葉珊瑚苷的含量分別為2.129%、7.005%和4.420%,分別是曬干處理的5.

5、14倍、1.52倍和17.06倍;杜仲皮中PDG、京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量分別為0.4420%、5.393%和4.242%,分別是曬干處理的4.70倍、1.09倍和1.78倍。5月份采集的杜仲皮可作為提取杜仲總木脂素及PDG的原料。此時(shí),樹液流暢,皮部與木質(zhì)部最宜分離,采皮后杜仲皮的再生效果好,且杜仲總木脂素及PDG的含量較高,分別為8.910%和0.3500%。
　　(3)研究了杜仲總木脂素及PDG的超聲和纖維素酶法輔助提取

6、工藝。首先,以杜仲總木脂素的提取率為指標(biāo),研究得到杜仲總木脂素的最佳超聲和纖維素酶法輔助提取工藝參數(shù)。再分別測定、比較上述最佳提取工藝條件下的PDG的得率,以確定杜仲PDG的最優(yōu)提取方法。結(jié)果杜仲總木脂素的最佳超聲提取工藝:使用體積分?jǐn)?shù)為65%的乙醇,液料比(mL:g)20:1,浸泡12h后,超聲輔助提取45min,提取1次。在此實(shí)驗(yàn)條件下,杜仲總木脂素的得率為7.652%,提取率為97.78%,PDG的得率為0.3050%;杜仲總木脂

7、素的最佳纖維素酶法提取工藝:使用pH為4的水溶液,液料比(mL:g)15:1,浸泡12h后,加入經(jīng)40℃活化10min后的纖維素酶0.7%,在60℃水浴中酶解3h,提取1次。在此實(shí)驗(yàn)條件下,杜仲總木脂素的得率為8.309%,提取率為93.27%,PDG的得率為0.1060%。結(jié)果表明,采用超聲輔助提取所得杜仲總木脂素的得率較酶法提取的低,而超聲提取的杜仲PDG得率卻高于酶法提取。
　　(4)研究了杜仲總木脂素及PDG的純化方法。采

8、用大孔吸附樹脂-C18反相硅膠柱層析-正相硅膠柱層析聯(lián)用技術(shù),對杜仲總木脂素及PDG進(jìn)行純化研究。以吸附量和解吸率為指標(biāo),篩選出適合純化杜仲總木脂素的AB-8樹脂,并研究了杜仲總木脂素的吸附動(dòng)力學(xué)、吸附熱力學(xué)、穿透曲線和洗脫曲線。研究表明,經(jīng)AB-8樹脂一次純化,可以制得含量為71.61%的杜仲總木脂素有效部位以及含量為8.070%的PDG粗品。再經(jīng)C18反相硅膠柱層析純化,得到含量為53.12%的PDG。最后通過正相硅膠柱層析進(jìn)一步純