黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、纖維素酶是降解纖維素的一組酶的總稱，是起協(xié)同作用的多組分酶系，從被發(fā)現(xiàn)起就受到世界各國生物界的重視?，F(xiàn)在纖維素酶應(yīng)用已擴(kuò)展到醫(yī)藥、紡織、日用化工、造紙、食品發(fā)酵、工業(yè)洗滌、煙草、石油開采、廢水處理及飼料等各個領(lǐng)域。 本實驗首先從黑曲霉產(chǎn)酶條件進(jìn)行研究，得出產(chǎn)纖維素酶的最佳條件為：麩皮∶稻草=1∶1，硫酸銨2.5％，尿素0.3％，磷酸二氫鉀0.2％，含水量60％時，在30℃條件下培養(yǎng)4d；產(chǎn)β-葡萄糖苷酶最佳條件為：在此基礎(chǔ)上，

2、調(diào)整麩皮∶稻草粉=1∶5，在30C條件下培養(yǎng)6d。 在對β-葡萄糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)研究中得出該酶反應(yīng)的最適pH為4.5；最適反應(yīng)溫度為60C。K+、Mg2+、Na+、Zn2+、Mn2+、Fe2+對酶活力有一定的激活作用，其中Mn2+激活能力最強，且最適激活濃度為0.01mol/L；Li+、Ca2+、Co2+、Sn2+對酶活有一定的抑制作用。在不同pH緩沖液中酶的穩(wěn)定性研究結(jié)果表明，該酶在pH4.0-5.0之間，12h內(nèi)較穩(wěn)定。在

3、酶的熱穩(wěn)定性研究中得出該酶的T1/2為66℃。在常溫下保存60d后，添加0.01mol/LMn2+的酶液的剩余酶活力最高，說明Mn2+利于酶液的保存；同樣條件下，添加0.5％PVP的酶液剩余活力與初始酶活力相差不多，說明PVP對酶活的穩(wěn)定作用最強。在飼料的制粒工藝中，溫度一般不高于70C。該酶在有激活劑MnSO4存在條件下，于70℃環(huán)境中保溫120s，仍保持與初始酶液相比111.78％的相對酶活，說明其高溫穩(wěn)定性較強，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

4、 同時，本實驗從黑曲霉發(fā)酵液中分離純化了β-葡萄糖苷酶，提純步驟通過(NH4)2SO4分級沉淀，SephadexG-50，SephadexG-100，DEAE-SephadexA-50等三步，該酶共提純72.13倍，回收率為17.29％。純化后的酶液經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，結(jié)果顯示出有兩條蛋白譜帶，由此推斷該酶可能由兩個亞基組成。 另外，對于該酶應(yīng)用于植物原生質(zhì)體制備方面也進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示在0.7mol/L甘