香菇多糖提取和β-葡萄糖苷酶應(yīng)用研究.pdf

1、香菇中的香菇多糖具有抗癌、抗腫瘤等多種生物活性。香菇β-葡萄糖苷酶在食品加工、生產(chǎn)中有著廣泛的應(yīng)用。本試驗(yàn)以香菇為原料，探索從其中提取香菇β-葡萄糖苷酶，水解大豆異黃酮和豆渣；提取香菇β-葡萄糖苷酶后剩余的香菇渣中還含有部分的香菇多糖，對(duì)其進(jìn)一步提取純化，主要通過熱水浸提、超聲輔助提取、微波輔助提取和亞臨界水提取四種方法提取香菇多糖，醇沉后并用Sevag法除去香菇多糖中的蛋白。并測(cè)定香菇多糖的抗氧化活性。
　　 測(cè)定多糖的方法主

2、要是用3.5-二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖的含量，通過苯酚-硫酸法測(cè)定溶液中的總糖的含量，換算得到多糖的含量。本試驗(yàn)對(duì)苯酚-硫酸方法進(jìn)行了進(jìn)一步研究，確定了該方法有很好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，確定測(cè)定多糖最佳波長(zhǎng)為490nm，最佳的提取液稀釋倍數(shù)為200倍。
　　 采用熱水浸提法提取香菇多糖時(shí)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了最佳的熱水浸取條件：提取溫度100℃，液固比40mL/g，提取時(shí)間3h，提取2次。采用超聲輔助法提取香菇多糖時(shí)，通

3、過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了最佳超聲輔助提取條件：提取溫度70℃，超聲時(shí)間45min，液固比30mL/g，超聲功率80W，提取2次。采用微波輔助法提取香菇多糖時(shí)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了最佳微波輔助提取條件：浸提溫度90℃，微波萃取時(shí)間10min，液固比25mL/g，微波功率是800W，提取2次。采用亞臨界水法提取香菇多糖時(shí)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了最佳亞臨界水法提取條件：亞臨界水溫度150℃，液固比30mL/g，浸提

4、時(shí)間為5min，浸提次數(shù)為2次。
　　 四種方法最佳條件下提取香菇多糖得率為：熱水浸提法4.90％，超聲輔助提取法5.17％，微波輔助提取法4.83％，亞臨界水法7.63％；提取時(shí)間依次為：3h，45min，10min，5min；液固比依次為40mL/g，30mL/g，25mL/g，30mL/g；提取溫度依次為100℃，70℃，90℃，150℃。由以上數(shù)據(jù)可知，熱水浸提法提取香菇多糖的耗時(shí)最長(zhǎng)，料液比較大，溫度要求高；超聲輔助提

5、取法相對(duì)于傳統(tǒng)熱水浸提法，提取時(shí)間縮短很多，液固比也減小，溫度要求最低。微波輔助提取法提取時(shí)間相對(duì)于以上兩種方法提取時(shí)間又縮短一些，液固比也相對(duì)減小，但是香菇多糖的得率稍微有所下降。亞臨界水提取方法提取率最高，提取瞬間完成。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，要根據(jù)實(shí)際情況選擇適宜的提取方法。
　　 通過醇沉試驗(yàn)選擇的最佳乙醇醇析終濃度為80％。Sevag法除蛋白的選定因素、水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。得到Sevag法對(duì)香菇多糖提取液除蛋白的最優(yōu)條件振蕩時(shí)

6、間為2min、靜置時(shí)間20min、樣液與Sevag試劑體積比為2:1、氯仿與正丁醇體積比為3:1。粗多糖樣品經(jīng)四次Sevag法純化多糖純度達(dá)到92.26％。
　　 進(jìn)行了香菇β-葡萄糖苷酶水解豆渣的研究。香菇β-葡萄糖苷酶水解鮮豆渣試驗(yàn)中，水溶性多糖含量由0.21g/L增加到0.27g/L；水解55℃下烘干豆渣試驗(yàn)中，水溶性多糖含量由0.80g/L增加到1.24g/L；水解90℃下烘干豆渣試驗(yàn)中，水溶性多糖含量由0.52g/L增

7、加到0.78g/L。采用豆渣酶解途徑進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)，取55℃下烘干豆渣100g，選用香菇β-葡萄糖苷酶進(jìn)行水解，水溶性多糖含量由0.82g/L增加到1.26g/L，水溶性多糖含量增加了54％。
　　 進(jìn)行了香菇β-葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮的研究。香菇β-葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮后，得到產(chǎn)品1.6g，黃豆苷水解率為98.15％，染料木苷水解率94.23％。
　　 對(duì)香菇多糖進(jìn)行了抗氧化活性測(cè)定研究，研究結(jié)果表明，香菇多糖具有