內(nèi)皮保護劑治療川崎病的作用及機制研究.pdf

1、第一部分：異種動物蛋白誘導川崎病兔模型的制作及評價
　　目的：
　　探討通過耳緣靜脈重復注射異種動物蛋白誘導幼兔產(chǎn)生冠狀動脈炎，驗證其與川崎病冠狀動脈病變的相似性，為研究川崎病提供實驗模型。
　　方法：
　　20只4-6周齡的日本大耳幼兔隨機分為模型組和對照組。兩組分別給予10%牛血清白蛋白和生理鹽水，第1天、第14天各重復注射一次。在首次注射后的第六周，兩組幼兔分別行冠脈造影，并在造影結(jié)束后一小時之內(nèi)顯微鏡下分

2、離冠狀動脈行組織病理學檢測和超微結(jié)構(gòu)的電鏡觀察，并留取肝臟、腎臟、肺臟及脾臟行組織病理學檢查。
　　結(jié)果：
　　(1)冠脈造影：僅模型組發(fā)現(xiàn)3只兔的冠狀動脈出現(xiàn)不同程度的擴張或狹窄（3/10）；
　　(2)組織病理學：模型組所有幼兔冠狀動脈均出現(xiàn)內(nèi)皮增厚、炎性細胞浸潤，不連續(xù)的冠脈內(nèi)皮；肺組織、腎臟組織呈現(xiàn)肉芽腫樣改變主要由單核細胞組成，且肺組織病變部位小血管腔幾乎完全被阻塞，部分肺泡塌陷，肺泡水腫不明顯；肝臟組織出現(xiàn)

3、點狀壞死，單核細胞聚集；
　　(3)透射電鏡結(jié)果：模型組兔冠狀動脈部分內(nèi)彈力膜斷裂，內(nèi)皮不連續(xù)，伴有內(nèi)皮細胞脫落和中層平滑肌細胞腫脹變性。
　　結(jié)論：
　　本研究證實牛血清白蛋白誘導產(chǎn)生的兔免疫性冠狀動脈炎，類似川崎病冠狀動脈炎改變，可作為模擬川崎病冠狀動脈損傷的實驗模型。
　　第二部分：辛伐他汀治療川崎病的作用及其機制研究
　　目的：
　　內(nèi)皮細胞保護劑尚未作為川崎病的常規(guī)治療手段，本研究擬在川崎病

4、幼兔模型上，給予內(nèi)皮保護劑辛伐他汀干預后，觀察其對川崎病的發(fā)病、病理改變及對內(nèi)皮功能的影響，并探討其中的機制，從而為從內(nèi)皮細胞保護的角度防治川崎病提供初步的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.實驗分組：將30只日本大耳幼兔隨機分為模型組、辛伐他汀干預組、對照組三組。模型組及辛伐他汀干預組均予耳緣靜脈注射牛血清白蛋白（10%，3ml/kg），對照組給予生理鹽水（3ml/kg），第1天、第14天各重復注射一次。辛伐他汀干預組于第2次

5、注射后連續(xù)三周每天予辛伐他汀干預（5mg/kg.d）灌胃；三組分別于第2次注射后第7、14、21天（即急性期、亞急性期、恢復期）分別采血一次。
　　2.檢測方法：
　　（1）評價建模成功的方法：
　?、俳M織病理學檢測各組幼兔的心肌及冠脈組織改變情況；
　?、诟鹘M幼兔行冠狀動脈造影檢查；
　?。?）ELISA法檢測血漿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的表達；
　?。?）流式細胞儀計數(shù)法測定各組幼兔血漿內(nèi)

6、皮微顆粒（CD62E+EMPs、CD105+EMPs、CD144+/CD42b-EMPs）的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.組織病理學結(jié)果：模型組和辛伐他汀干預組均出現(xiàn)不同程度的炎癥浸潤。模型組可見血管內(nèi)膜局部明顯增厚，冠脈內(nèi)皮不連續(xù)；而辛伐他汀干預組幼兔冠狀動脈炎性細胞浸潤較輕，內(nèi)膜增厚不明顯；對照組冠脈內(nèi)皮光滑連續(xù)。
　　2.eNOS水平：辛伐他汀干預組eNOS表達水平低于模型組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義；辛

7、伐他汀干預組eNOS表達水平與對照組相比，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。
　　3.辛伐他汀干預組KD幼兔急性期、亞急性期、恢復期血漿EMPs表達水平與模型組和對照組的比較：
　?。?）辛伐他汀干預組及模型組三種表型的EMPs表達水平均高于對照組，P＜0.01，差異有顯著的統(tǒng)計學意義；
　?。?）辛伐他汀干預組與模型組進行比較：
　　①CD62E+EMPs、CD105+EMPs水平比較：辛伐他汀干預組表達均低于模

8、型組，P＜0.01，差異有顯著的統(tǒng)計學意義；
　?、贑D144+/CD42b-EMPs：急性期辛伐他汀干預組表達低于模型組（P=0.001）P＜0.01，差異有顯著的統(tǒng)計學意義；而亞急性期（P=0.199）恢復期（P=0.096）辛伐他汀干預組EMPs表達低于模型組，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　4.模型組幼兔血漿EMPs表達水平：
　?。?）CD62E+EMPs：急性期明顯高于亞急性期、恢復期(P均＜0.05)差異有統(tǒng)計

9、學意義；亞急性期與恢復期比較，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義；
　　（2）CD105+EMPs：急性期高于恢復期（P＜0.05）差異有統(tǒng)計學意義；急性期與亞急性期比較及亞急性期與恢復期比較，P均＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義；
　?。?）CD144+/CD42b-EMPs：恢復期表達高于急性期和亞急性期，亞急性期表達高于急性期，P均＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1.辛伐他汀可以降低內(nèi)皮微顆粒的釋放