海島棉纖維發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)譜分析及功能基因的發(fā)掘.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文海島棉纖維發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)譜分析及功能基因的發(fā)掘姓名：涂禮莉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：張獻(xiàn)龍20070501華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2004級博士學(xué)位論文DPA，我們發(fā)現(xiàn)海島棉76條ESTs表達(dá)水平上調(diào)而陸地棉中只有19條ESTs表達(dá)上調(diào)；在20DPA，我們發(fā)現(xiàn)陸地棉中只有134條ESTs表達(dá)水平上調(diào)而海島棉19條ESTs表達(dá)上調(diào)。這些差異可能可以部分地解釋海島棉和陸地棉纖維品質(zhì)和產(chǎn)量的區(qū)別。7在表達(dá)譜分

2、析過程中，我們發(fā)現(xiàn)海島棉和陸地棉纖維發(fā)育相關(guān)的基因氨基酸序列和核苷酸序列存在明顯的差異，除了核苷酸的差異外，還有明顯的序列插入(缺失)，特別是YUTR。如GbPDF與GhPDFlexpansins：GbGLP與GhGLP8改造了pCAMBIA2301，通過PCR介導(dǎo)突變法去掉t／PTII上游的Ncol、BgllI兩個酶切位點(diǎn)并將其命名為pCAMBIA2301m，目前已應(yīng)用到超表達(dá)基因功能驗(yàn)證上。9我們分析了GbEX2和GbEX3的表達(dá)特

3、性，GbEX2為海島棉纖維特異表達(dá)基因，GbEX3在海島棉和陸地棉的纖維中特異表達(dá)。并將其進(jìn)行了RNAi抑制和超表達(dá)的轉(zhuǎn)基因，目前已經(jīng)得到再生苗。10克隆了GbEX2和GbEX3的啟動子，并分析了其核心啟動子的序列及其順式作用元件。GbEX2和GbEX3的啟動子序列整體上相似性較高，但存在堿基的差異和序列插入(缺失)，可能就是這些差異造成了兩個基因表達(dá)的差異。我們還將啟動子構(gòu)建到pBll21和pBINmgfpSER載體上轉(zhuǎn)化了陸地棉品系

4、YZl。11我們根據(jù)常見的看家基因設(shè)計了7對引物(j韶rRNA，Histone3，UBQ7ActinCyclophilinGbpolyubiquitinj和Gbpolyubiquitin一2)，用相對的絕對定量法驗(yàn)證了在棉花不同組織和不同發(fā)育階段(22個樣品)表達(dá)水平的穩(wěn)定性。發(fā)現(xiàn)在纖維發(fā)育的后期(17DPA以后)這些基因都表達(dá)下調(diào)，而纖維發(fā)育后期特異表達(dá)基因AGP從15開始到27DPA～直都呈上升表達(dá)趨勢。12根據(jù)我們的結(jié)果，對于非纖