海島棉纖維發(fā)育相關基因表達譜分析及功能基因的發(fā)掘.pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文海島棉纖維發(fā)育相關基因表達譜分析及功能基因的發(fā)掘姓名：涂禮莉申請學位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：張獻龍20070501華中農業(yè)大學2004級博士學位論文DPA，我們發(fā)現(xiàn)海島棉76條ESTs表達水平上調而陸地棉中只有19條ESTs表達上調；在20DPA，我們發(fā)現(xiàn)陸地棉中只有134條ESTs表達水平上調而海島棉19條ESTs表達上調。這些差異可能可以部分地解釋海島棉和陸地棉纖維品質和產量的區(qū)別。7在表達譜分

2、析過程中，我們發(fā)現(xiàn)海島棉和陸地棉纖維發(fā)育相關的基因氨基酸序列和核苷酸序列存在明顯的差異，除了核苷酸的差異外，還有明顯的序列插入(缺失)，特別是YUTR。如GbPDF與GhPDFlexpansins：GbGLP與GhGLP8改造了pCAMBIA2301，通過PCR介導突變法去掉t／PTII上游的Ncol、BgllI兩個酶切位點并將其命名為pCAMBIA2301m，目前已應用到超表達基因功能驗證上。9我們分析了GbEX2和GbEX3的表達特

3、性，GbEX2為海島棉纖維特異表達基因，GbEX3在海島棉和陸地棉的纖維中特異表達。并將其進行了RNAi抑制和超表達的轉基因，目前已經得到再生苗。10克隆了GbEX2和GbEX3的啟動子，并分析了其核心啟動子的序列及其順式作用元件。GbEX2和GbEX3的啟動子序列整體上相似性較高，但存在堿基的差異和序列插入(缺失)，可能就是這些差異造成了兩個基因表達的差異。我們還將啟動子構建到pBll21和pBINmgfpSER載體上轉化了陸地棉品系

4、YZl。11我們根據(jù)常見的看家基因設計了7對引物(j韶rRNA，Histone3，UBQ7ActinCyclophilinGbpolyubiquitinj和Gbpolyubiquitin一2)，用相對的絕對定量法驗證了在棉花不同組織和不同發(fā)育階段(22個樣品)表達水平的穩(wěn)定性。發(fā)現(xiàn)在纖維發(fā)育的后期(17DPA以后)這些基因都表達下調，而纖維發(fā)育后期特異表達基因AGP從15開始到27DPA～直都呈上升表達趨勢。12根據(jù)我們的結果，對于非纖