兩個與棉纖維發(fā)育相關基因的克隆與鑒定.pdf

1、棉纖維是重要的紡織工業(yè)原料,在國民經濟和人民生活中占有重要的位置。棉纖維是由棉花胚珠外珠被表皮層的單細胞發(fā)育而成,在受精后約16天,棉纖維細胞可延伸至2.5-3.0cm。棉纖維發(fā)育過程中合成大量的纖維素與非纖維素多糖參與纖維形態(tài)的建成,這一發(fā)育過程有眾多的糖類物質參與,進行了復雜的生化代謝反應,因此棉花纖維發(fā)育相關基因的克隆既具有巨大的潛在經濟價值,也有助于植物細胞發(fā)育以及纖維素合成分子機理的闡明。 本研究從陸地長絨種質系723

2、5不同發(fā)育時期的棉纖維混合cDNA文庫中分離出兩個cDNA克?。?1)水通道蛋白(aquaporin)我們將其命名為GhAQP。該cDNA克隆插入片段長度為1207bp,最大的ORF為837bp,編碼279個氨基酸其理論上的等電點Theoretical pI=9.13,分子量Mw=29.7KD。Blastx結果表明,該cDNA與已報道的多種質膜內在蛋白(plasma membrane intrinsic protein)和水通道蛋白(a

3、quaporin)cDNA克隆相似性均極高。(2)小泡相關膜蛋白(VESICLE-ASSOCIATED MEMBRANE PROTEIN),我們將其命名為GhVAMP。該cDNA克隆插入片段長度為1080bp,開放讀碼框長度為549bp,編碼183個氨基酸,其理論上的等電點Theoretical pI=9.13,分子量Mw=20.4KD。Blastx結果表明,該cDNA序列與若干synptobrevin-related protein相

4、似程度很高；(3)其余5個cDNA克隆經過BLAST比對,與已知的基因同源性很低。 我們采用signalP程序對這兩個基因進行了N端信號肽預測,GhAQP沒有典型的信號肽,GhVAMP有典型的信號肽,說明這個基因可能是分泌蛋白。采用NetPhos2.0程序對這兩個基因進行了磷酸化位點預測,GhAQP有12個磷酸化位點,GhVAMP有6個磷酸化位點。采用NetNGlyc1.0預測糖基化位點,都有一個糖基化位點。并且對這兩個基因進行