兩個(gè)與棉纖維發(fā)育相關(guān)基因的克隆與鑒定.pdf

1、棉纖維是重要的紡織工業(yè)原料,在國民經(jīng)濟(jì)和人民生活中占有重要的位置。棉纖維是由棉花胚珠外珠被表皮層的單細(xì)胞發(fā)育而成,在受精后約16天,棉纖維細(xì)胞可延伸至2.5-3.0cm。棉纖維發(fā)育過程中合成大量的纖維素與非纖維素多糖參與纖維形態(tài)的建成,這一發(fā)育過程有眾多的糖類物質(zhì)參與,進(jìn)行了復(fù)雜的生化代謝反應(yīng),因此棉花纖維發(fā)育相關(guān)基因的克隆既具有巨大的潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值,也有助于植物細(xì)胞發(fā)育以及纖維素合成分子機(jī)理的闡明。 本研究從陸地長(zhǎng)絨種質(zhì)系723

2、5不同發(fā)育時(shí)期的棉纖維混合cDNA文庫中分離出兩個(gè)cDNA克?。?1)水通道蛋白(aquaporin)我們將其命名為GhAQP。該cDNA克隆插入片段長(zhǎng)度為1207bp,最大的ORF為837bp,編碼279個(gè)氨基酸其理論上的等電點(diǎn)Theoretical pI=9.13,分子量Mw=29.7KD。Blastx結(jié)果表明,該cDNA與已報(bào)道的多種質(zhì)膜內(nèi)在蛋白(plasma membrane intrinsic protein)和水通道蛋白(a

3、quaporin)cDNA克隆相似性均極高。(2)小泡相關(guān)膜蛋白(VESICLE-ASSOCIATED MEMBRANE PROTEIN),我們將其命名為GhVAMP。該cDNA克隆插入片段長(zhǎng)度為1080bp,開放讀碼框長(zhǎng)度為549bp,編碼183個(gè)氨基酸,其理論上的等電點(diǎn)Theoretical pI=9.13,分子量Mw=20.4KD。Blastx結(jié)果表明,該cDNA序列與若干synptobrevin-related protein相

4、似程度很高；(3)其余5個(gè)cDNA克隆經(jīng)過BLAST比對(duì),與已知的基因同源性很低。 我們采用signalP程序?qū)@兩個(gè)基因進(jìn)行了N端信號(hào)肽預(yù)測(cè),GhAQP沒有典型的信號(hào)肽,GhVAMP有典型的信號(hào)肽,說明這個(gè)基因可能是分泌蛋白。采用NetPhos2.0程序?qū)@兩個(gè)基因進(jìn)行了磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè),GhAQP有12個(gè)磷酸化位點(diǎn),GhVAMP有6個(gè)磷酸化位點(diǎn)。采用NetNGlyc1.0預(yù)測(cè)糖基化位點(diǎn),都有一個(gè)糖基化位點(diǎn)。并且對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行