2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、鏈霉菌(Streptomyces)是在工業(yè)上常用的微生物之一,能產生大量的次級代謝物,主要有抗生素等,然而有關鏈霉菌胞外多糖的研究除本實驗室外國內外尚未見報道。本研究室自行構建了以基因重組白細胞介素—1(Interleukin—1,IL-1)可溶性受體為靶位的受體拮抗劑篩選模型,獲得了一種由鏈霉菌139產生的新型胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)依博素,經(jīng)藥效學研究證明依博素對類風濕性關節(jié)炎有明顯療效,有可能發(fā)展成為

2、臨床治療類風濕性關節(jié)炎的新藥。 依博素生物合成基因簇(ste)包含27個完整開放閱讀框(ORF),已對不同基因的功能進行深入研究。本文選擇了ste7、ste26和ste27基因作為研究對象。 根據(jù)同源性分析發(fā)現(xiàn),ste7基因編碼的蛋白與不同來源的糖基轉移酶具有很高的同源性。為了確定ste7編碼產物的生化性質,本研究在大腸桿菌中克隆表達了Ste7,對表達產物進行純化,酶學性質研究證明Ste7為巖藻糖基轉移酶,能夠催化GDP

3、—巖藻糖中的巖藻糖轉移到單糖延長鏈受體上,在依博素生物合成中起重要作用。該酶的Km值為36.87±3.04μM。 為了解ste26在依博素生物合成中的作用,對ste26進行了同源重組雙交換基因阻斷實驗,獲得了基因缺失株Streptomyces sp.139(ste26—)。與依博素相比,基因突變株產生的多糖衍生物EPS—26m的單糖組分不同程度有所變化;對IL-1R拮抗活性分析顯示,EPS—26m的活性沒有發(fā)生明顯變化,但EPS

4、—26m的峰位分子量明顯低于依博素。據(jù)此推測ste26可能在依博素生物合成過程中起修飾作用。 同源性分析顯示ste26基因編碼蛋白與乙酰轉移酶具有很高的同源性。為了解ste26編碼蛋白的生化性質,本研究在大腸桿菌中對ste26進行了克隆和表達,對表達產物進行純化,酶學性質研究證明Ste26為精胺/精脒乙酰轉移酶,能夠催化乙酰輔酶A(AcCoA)中的乙酰基轉移到精胺、精脒和多聚賴氨酸上,具有一定的底物特異性。其中精胺是最適底物,酶

5、的Km為72.14±7.39μM、最適溫度為37℃、最適pH為7.5。 為了研究ste27在依博素生物合成中的作用,對ste27進行了基因阻斷實驗,獲得了基因突變株Streptomyces sp.139(ste27—),其產生的多糖衍生物EPS—27m的單糖組分有所變化;與依博素相比,EPS—27m對IL-1R的拮抗活性沒有發(fā)生明顯變化;此外EPS—27m的峰位分子量明顯低于依博素。綜上所述,ste27基因的敲除對依博素生物合成

6、有所影響,但未導致其衍生物喪失活性,因此推測ste27可能在依博素生物合成中可能起修飾基因作用。 同源性分析顯示ste27基因編碼蛋白與乙酰轉移酶具有很高的同源性。為了解ste27編碼蛋白的生化性質,在大腸桿菌中對ste27進行了克隆和表達。酶學性質研究證明Ste27為精胺/精脒乙酰轉移酶,能夠催化AcCoA中的乙?;D移到精胺、精脒、多聚賴氨酸和6—磷酸葡糖胺上,具有一定的底物特異性。其中精脒是最適底物,酶的Km為58.97±

7、2.47μM、最適溫度為28℃、最適pH為7.5。 為了獲得新型胞外多糖衍生物,更加深入了解ste26和ste27在依博素生物合成中的作用,利用同源重組雙交換法對ste26和ste27進行了雙敲除,經(jīng)Southern blot驗證,獲得了雙基因缺失株Streptomyces sp.139(ste26——27—)。與依博素相比,雙基因缺失株Streptomyces sp.139(ste26——27—)產生的胞外多糖衍生物EPS—2

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