整合子與不同來源沙門菌株耐藥性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過比較不同來源沙門菌株的耐藥性差異、耐藥酶攜帶情況、Ⅰ類整合子攜帶率和整合子上耐藥基因攜帶情況，分析其相互之間的關(guān)系，探討整合子在細菌耐藥性的獲得和傳遞中的作用，為預(yù)防和控制食源性疾病，指導臨床合理用藥，制定干預(yù)細菌多重耐藥性的產(chǎn)生及播散措施提供一定的理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.沙門菌株的收集與鑒定
　　 共收集了133株不同來源的沙門菌：健康從業(yè)人員腸道內(nèi)分離菌株（健康攜帶株）111株

2、：其中2005年為45株，2007年為66株；食品中毒標本中分離菌株（食品株）8株；臨床標本分離菌株（感染株）14株。對收集到的菌株首先依據(jù)通用規(guī)范（GB/T4789.4-2003），用沙門菌屬診斷血清進行血清學實驗鑒定，再使用腸桿菌鑒定系統(tǒng)API20E進行復核鑒定，確保全部菌株均為沙門菌。
　　 2.不同來源的沙門菌株的耐藥性及耐藥酶的檢測
　　 對收集的菌株采用Kerby-Bauer紙片擴散法進行了6大類共15種抗菌

3、藥物的敏感性測定；對耐3代頭孢菌素的菌株，采用雙紙片協(xié)同試驗檢測了ESBLs攜帶情況，采用抗菌藥物及抑制劑組合耐藥表型篩選法檢測了AmpC酶的攜帶情況。
　　 3.不同來源的沙門菌株的Ⅰ類整合子檢測
　　 采用PCR方法，對收集的菌株進行了Ⅰ類整合子篩選。在確認了Ⅰ類整合子陽性菌株的基礎(chǔ)上，對其整合的耐藥基因盒進行擴增，擴增產(chǎn)物純化后進行測序，序列分析后對耐藥基因盒的種類及其結(jié)構(gòu)進行分析。
　　 結(jié)果：
　

4、　 1.標本的生物學特性：133株實驗菌株的氧化酶均為陰性；A-F多價O抗原血清凝集全部為陽性；血清分型共得到36個血清型，其中占前6位的為：德爾卑沙門菌、山夫登堡沙門菌、豬霍亂沙門菌、阿哥納沙門菌、明斯特沙門菌和鼠傷寒沙門菌，分別占14.3％、12.0％、10.5％、9.8％、6.0％和3.8％。菌株的API編碼以6704752和6704552為主，分別占47.4％和36.1％。
　　 2.藥物敏感試驗結(jié)果：健康攜帶株、食品

5、株和感染株對兩種或兩種以上抗菌藥物的耐藥率分別為9.91％、12.50％和57.14％，對單一抗菌藥物以鏈霉素耐藥率最高，而對頭孢菌素類藥物較為敏感。
　　 2.1111株健康攜帶株對兩種或兩種以上抗菌藥物的耐藥率2007年高于2005年，分別為12.12％和6.67％。健康攜帶株對四環(huán)素與鏈霉素耐藥率最高，均為13.51％，但對鏈霉素耐藥中介率高達65.77％。
　　 2.28株食品株對萘啶酸耐藥率最高，為37.5％，

6、其次對四環(huán)素的耐藥率為25％，對鏈霉素中介率達37.5％。
　　 2.314株感染株對各種抗菌藥物耐藥率由高到低的順序為：萘啶酸（66.67％），鏈霉素（46.67％），四環(huán)素（40％），氨芐西林與甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲基異惡唑（33.33％），頭孢噻呋與氯霉素（26.67％），頭孢噻吩、頭孢曲松鈉、慶大霉素、卡那霉素為（13.33％）?？梢姼腥局昴退幮暂^腸道株與食品株明顯增強。所有菌株對頭孢西丁的耐藥率為0；耐3代頭孢菌素的菌株

7、對碳青酶烯類抗菌藥物亞胺培南（IPM）的耐藥率均為0。
　　 3.超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）與AmpC酶的檢測結(jié)果：健康攜帶株、食品株和感染株的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶攜帶率分別為0、12.5％和7.1％； AmpC的攜帶率均為0。
　　 4.整合子檢測結(jié)果：健康攜帶株、食品株和感染株的整合子攜帶率為9.91％、12.50％和71.43％。整合子陽性菌株耐藥基因盒陽性率分別為5.41％、0和50％；基因盒的種類分別是編碼

8、耐磺胺類藥物甲氧氨芐嘧啶的基因盒dfrA15、dhfrⅫ、編碼耐氨基糖苷類抗菌藥物四環(huán)素的基因盒aadA1、耐鏈霉素-壯觀霉素的基因盒aadA2和一個功能未知的基因盒orfF。
　　 4.1111株健康攜帶株中有11株為Ⅰ類整合子陽性，攜帶率為9.91％，其中6株細菌整合子攜帶有耐藥基因盒，除第13號多耐株攜帶3種耐藥基因盒：orfF、aadA2、dhfrⅫ外，其余5株僅檢出一個基因盒aadA2。Ⅰ類整合子陽性率2007年（23

9、.08％）高于2005年（6.67％）。
　　 4.2食品株中的多耐株：耐13種抗菌藥物的114號菌只檢測出Ⅰ類整合子但未檢測出耐藥基因盒。
　　 4.314株感染株中10株為Ⅰ類整合子陽性株，其中7株攜帶耐藥基因盒，耐藥基因盒種類有5種：aadA1、aadA2、dhfrⅫ、dfrA15和orfF。感染株中耐3或3種以上抗菌藥物的8株中有5株為Ⅰ類整合子陽性株，占62.5％。整合子陽性率和耐藥基因盒的種類都較健康攜帶株與

10、食品株更高、更復雜。
　　 結(jié)論：
　　 1.臨床感染株的耐藥性及整合子陽性率均高于食品株和健康攜帶株；2007年分離的健康攜帶株耐藥性與整合子陽性率均高于2005年。表明沙門菌的耐藥性在逐年增加，提示了監(jiān)測細菌耐藥性的迫切性，以及合理應(yīng)用抗菌藥物的必要性。
　　 2.三種來源的沙門菌株的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）攜帶率也是臨床感染株與食品株高于健康攜帶株，與耐藥性一致，表明細菌耐藥性的產(chǎn)生與其所處環(huán)境中的

11、抗菌藥物壓力相關(guān)。
　　 3.全部菌株對亞胺培南敏感，AmpC酶攜帶率為零。提示耐三代頭孢菌素的沙門菌感染可選用加酶抑制劑的三代頭孢菌素和亞胺培南進行治療。
　　 4.感染株整合子陽性率和耐藥基因盒的種類都較健康攜帶株與食品株更高、更復雜，這與細菌的耐藥性、耐藥酶檢測結(jié)果一致，證明了整合子捕獲耐藥基因盒與抗菌藥物的選擇壓力有關(guān)，整合子介導了細菌耐藥的水平傳播，在細菌耐藥性的產(chǎn)生中具有重要作用。篩查細菌整合子的攜帶情況，能