銅綠假單胞菌的整合子檢測及其與耐藥相關(guān)性的研究.pdf

1、目的:了解威海地區(qū)銅綠假單胞菌臨床連續(xù)分離株耐藥情況、整合子的攜帶率及其基因盒類型。分析整合子在銅綠假單胞菌耐藥中發(fā)揮的作用，為指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗菌藥物、有效預(yù)防和控制耐藥細(xì)菌感染提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:采用Microscanwalkway40S全自動微生物分析儀和API板條對威海市立醫(yī)院2012年5月、6月臨床分離的92株銅綠假單胞菌進(jìn)行鑒定，Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)及核

2、酸克隆測序等方法分析整合子的攜帶率及其基因盒類型，對藥敏結(jié)果和耐藥基因檢測結(jié)果進(jìn)行綜合分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、威海地區(qū)銅綠假單胞菌的總體耐藥率較低。β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥率大于5％的有頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉（舒普琛）、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢唑肟，耐藥率分別為71.8％、76.1％、13.0％、8.6％、6.5％、6.5％。β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥率小于5％的有頭孢他啶、頭孢吡肟、亞胺培南、美

3、羅培南、阿莫西林/棒酸、頭飽西丁、頭孢呋辛、氨曲南、替卡西林/棒酸等。氨基糖苷類藥物如阿米卡星耐藥率為:10.9％。喹喏酮類藥物如環(huán)丙、左氧的耐藥率分別為10.9％、10.9％。
　　 2、整合子中只有Ⅰ類整合子陽性，未發(fā)現(xiàn)Ⅱ、Ⅲ類整合子。有12株銅綠假單胞菌用PCR方法擴(kuò)增出Ⅰ類整合子基因，Ⅰ類整合子擴(kuò)增陽性率13％(12/92)。其中染色體上Ⅰ類整合子陽性率6.5％(6/92);質(zhì)粒上Ⅰ類整合子陽性率為8.6％(8/92)。

4、有兩株菌質(zhì)粒和染色體上同時擴(kuò)增出Ⅰ類整合子，而且整合子的可變區(qū)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同，說明該菌的染色體上的整合子和質(zhì)粒上的整合子攜帶相同的耐藥基因盒。測序結(jié)果表明在Ⅰ類整合子中攜帶的耐藥基因盒共有6種，分別介導(dǎo)對β內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類及氯酶素類抗生素耐藥。耐藥基因盒組合模式有3種aph(3')-lia、aac(6')-Ⅱc-OXA-10、acc(6')-Ⅰb-OXA-1-catB3，第三種組合方式最常見，占整合子陽性株的43％(6/14

5、)。
　　 3、整合子陽性菌株耐藥率與整合子陰性株耐藥率的比較，經(jīng)Chi-squaretest，P＞0.05，沒有明顯差異，這里表明整合子陽性菌株攜帶的耐藥基因不表達(dá)或表達(dá)較弱，而使與整合子陰性株的耐藥差異無顯著性。轉(zhuǎn)化菌載體上自己的啟動子較弱，所以轉(zhuǎn)化菌轉(zhuǎn)入的耐藥基因不表達(dá)，耐藥表型為敏感，提示整合子上整合的耐藥基因需要適宜的啟動子才表達(dá)。但是整合子陽性菌攜帶的耐藥基因，卻可導(dǎo)致耐藥基因的水平及垂直播散。
　　 結(jié)論: