小鼠對(duì)副粘病毒Tianjin株易感性的研究.pdf

1、人副流感病毒Ⅰ型(HPIV-1)為一種有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，是引起嬰幼兒呼吸道疾病的重要病原體之一。每年嬰幼兒因此病毒引發(fā)的呼吸道疾病住院率達(dá)6％，臨床表現(xiàn)可為鼻炎、咽炎、中耳炎、喉炎、細(xì)支氣管炎、肺炎等[1，2]，目前臨床尚無(wú)特效的治療藥物及預(yù)防用疫苗，且缺乏適宜的小動(dòng)物模型用于研究。以嚙齒類動(dòng)物為主要感染對(duì)象的仙臺(tái)病毒(Sendai virus，SeV)與HPⅣ-1在基因組序列和血清學(xué)方面高度相關(guān)[3]，兩者存在保護(hù)性交叉免疫

2、反應(yīng)，還有相似的傳播途徑及組織親嗜性[4]，因此，SeⅤ被認(rèn)為是研究HPⅣ-1致病性的最佳模型及疫苗的最佳候選者。
　　副粘病毒Tianjin株是1999年從某動(dòng)物中心群體突發(fā)的嚴(yán)重下呼吸道感染致死的普通棉耳狨猴肺組織中分離到的一株高血凝效價(jià)病毒，經(jīng)全基因組測(cè)序(GenBank accession number EF679198)和種系進(jìn)化分析，證明存在獨(dú)特的440個(gè)核苷酸和110個(gè)氨基酸殘基的變異，是SeⅤ新的基因型。SeⅤ本是

3、嚙齒類動(dòng)物的嗜肺病毒，卻表現(xiàn)出跨種傳播和對(duì)普通棉耳狨猴的高致病性。在普通棉耳狨猴群體感染流行期間，飼養(yǎng)在同一動(dòng)物中心的小鼠無(wú)一例發(fā)病，當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)的小鼠種類主要為Kunming和BALB/c。為了探明Tianjin株是否對(duì)其他種類的小鼠也具有低致病性，同時(shí)尋找對(duì)Tianjin株病毒感染敏感的小型嚙齒類動(dòng)物做為模型，我們選取了不同品系的小鼠對(duì)副粘病毒Tianjin株易感性做進(jìn)一步研究。
　　首先，將129Sv、DBA/2、Kun

4、ming、BALB/c四種小鼠分別接種5μ11.5×107PFU和30μ11.5×107 PFU Tianjin株病毒液，以接種5μl和30μl磷酸鹽緩沖液(PBS)作為對(duì)照，連續(xù)觀察12天小鼠的體重變化，計(jì)算生存率。結(jié)果顯示129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c小鼠在接種副粘病毒Tianjin株5μl后，最高平均體重變化分別為-13.0％、-4.7％、6.6%、6.3％，12天生存率均為100％；接種30μl病毒液，最高

5、平均體重下降-21.7％、-30.3％、-16.7％、-9.6％；12天生存率分別為20%、0％、80％、100％。根據(jù)體重變化和生存率，四種鼠從易感到耐受的順序?yàn)镈BA/2>129Sv>Kunming>BALB/c。
　　為了進(jìn)一步探討四種鼠對(duì)副粘病毒Tianjin株易感性的不同，我們用30μl3×105PFU病毒分別滴鼻接種129Sv、DBA/2、Kunming和BALB/c四種小鼠，于感染后的第1、3、5、7、9和11天分別

6、犧牲小鼠，取右肺、氣管和鼻咽組織，空斑試驗(yàn)檢測(cè)各組織中的病毒滴度，動(dòng)態(tài)觀察小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制情況。同時(shí)，將左肺組織置于4％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋制成切片，經(jīng)HE染色，鏡下觀察病理變化。結(jié)果顯示，(1)雖然病毒在4種鼠的肺、鼻咽和氣管組織中復(fù)制程度不同，但均為肺組織病毒滴度最高，鼻咽次之，氣管最低，繪制出的病毒滴度曲線趨勢(shì)各種鼠相似，均表現(xiàn)為增高后降低；(2)四種鼠三種組織病毒滴度峰值出現(xiàn)的時(shí)間不同。DBA/2鼠的肺、鼻咽和氣管病毒滴度

7、峰值均在第5天；129Sv鼠的肺和鼻咽在第5天最高，而氣管表現(xiàn)延遲出現(xiàn)在第7天。Kunming鼠肺的病毒滴度峰值出現(xiàn)在第7天，鼻咽在第3天，氣管在第5天。BALB/c鼠肺和鼻咽在第5天，氣管在第3天。(3)肺組織病理改變，DBA/2鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中最明顯，從接種后第1天至第7天肺病變逐漸加重，是四種鼠中最早出現(xiàn)病變?yōu)?++的鼠種，鏡下可見成片的淋巴細(xì)胞聚集在肺間質(zhì)內(nèi)，有大量的中性粒細(xì)胞，能明顯識(shí)別巨噬細(xì)胞，肺泡囊內(nèi)可見大量滲出物，粘膜

8、下層增生明顯，氣道上皮損傷嚴(yán)重，整個(gè)視野內(nèi)可見壞死的細(xì)胞，基本無(wú)完整的肺泡結(jié)構(gòu)。129Sv鼠肺病變次之，雖然病變也出現(xiàn)了+++，但時(shí)間較DBA/2遲，出現(xiàn)在第9天，病理過程較DBA/2緩慢。Kunming、BALB/c病變相對(duì)較輕，二者最高病理分級(jí)均為++，Kunming出現(xiàn)++的時(shí)間較BALB/c早，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。在四種鼠中，BALB/c鼠的肺病變最輕、出現(xiàn)時(shí)間晚、持續(xù)時(shí)間短。結(jié)論：綜合體重變化、生存率、病毒增殖情況和病理改變4項(xiàng)指標(biāo)，