大鼠腦缺血再灌注星形膠質(zhì)細(xì)胞GGTI與細(xì)胞增殖的關(guān)系研究.pdf

1、目的：研究大鼠腦缺血再灌注損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞GGTI與星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增殖的關(guān)系。
　　 方法：分為在體和離體兩部分。
　　 在體實(shí)驗(yàn)：取體重210-250g適齡成年SD大鼠，采用四動(dòng)脈阻斷法（4-VO）制作全腦缺血模型。假手術(shù)組（sham組）僅電凝雙側(cè)椎動(dòng)脈作為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組采用四動(dòng)脈阻斷法缺血15min，再灌注6h、24h、72h以及7d，多聚甲醛灌注固定后取腦，冰凍切片焦油紫染色觀(guān)察海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞死亡情況以

2、明確缺血模型成功與否，免疫熒光雙標(biāo)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和異戊烯基轉(zhuǎn)移酶特異的β亞基（GGTIβ，后同），觀(guān)察海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞在缺血再灌注不同時(shí)間GGTIβ的變化。
　　 離體實(shí)驗(yàn)：取P0新生大鼠腦皮質(zhì)行星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)，培養(yǎng)14～18d后傳代，并用振蕩法以純化細(xì)胞，傳代2～3次后得到純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞。純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞用無(wú)糖培養(yǎng)基并在含1％O2三氣培養(yǎng)箱中持續(xù)缺氧培養(yǎng)6h（缺糖缺氧模型，OGD）后，復(fù)糖復(fù)氧

3、培養(yǎng)12h、24h、48h、72h、5d、7d。免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)GFAP和GGTIβ在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的水平；Western Blot檢測(cè)復(fù)糖復(fù)氧不同時(shí)間后GGTIβ的變化。用GGTI抑制劑處理培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞后，MTT和CCK-8檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖情況。
　　 結(jié)果：在體部分：缺血再灌注后大鼠腦海馬CA1區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞GGTIβ呈現(xiàn)高表達(dá)，其水平隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而增加；離體部分：缺糧缺氧后星形膠質(zhì)細(xì)胞GGTIβ蛋白水平隨復(fù)