活血開竅湯對大鼠腦缺血再灌注損傷NO含量及細胞凋亡的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 腦血管病是嚴重威脅人類尤其是中老年人健康的常見病、多發(fā)病，具有高發(fā)病率、高致殘率和高致死率的特點，其中70-80％是缺血性腦血管病。腦缺血再灌注損傷是缺血性腦梗死區(qū)在血液供應恢復后出現(xiàn)的更嚴重的腦損傷，其損傷發(fā)生機制比較復雜，抑制再灌注損傷是治療缺血性腦血管病的重要環(huán)節(jié)。盡管國內外研究者對此進行了大量的研究并取得一定進展，但仍缺乏有針對性的治療策略中藥治療缺血性腦血管病已有悠久的歷史，具有療效確切、不良反應少

2、、藥理作用廣泛等優(yōu)點，可以從多個層次和多個環(huán)節(jié)上起到保護作用，特別適合腦缺血所致的多種病理改變，日益引起醫(yī)學界的關注。
　　 活血開竅湯是導師李平教授治療缺血性腦卒中的經驗方，該方由天麻、牛膝、寄生、遠志、葛根、川芎、地龍、丹參、赤芍組成，具有活血開竅、補腎通絡的功效。多年來的臨床實踐證明，此方在治療缺血性腦卒中方面確有療效。本實驗研究通過觀察缺血再灌注大鼠腦組織中NO含量和神經細胞凋亡數(shù)的變化，探討活血開竅湯對大鼠腦缺血再灌注

3、損傷保護作用的機制，進一步為臨床用藥提供理論和實驗依據，以便推廣應用。
　　 方法：
　　 本課題采用Wistar雄性成年大鼠作為實驗動物，研究活血開竅湯對局灶性腦缺血再灌注損傷的保護機制。將大鼠隨機分為空白對照組、假手術組、模型組、活血開竅湯治療組。各組在相同條件下分籠喂養(yǎng)，實驗開始第一天起給予治療組活血開竅湯2.2g/100mg/d灌胃，假手術組和模型組分別給予等量的生理鹽水灌胃，各組每天灌胃1次，連續(xù)灌胃給藥5天。

4、至造模成功后繼續(xù)重復手術前的給藥方式致指定時間點。末次灌胃給藥后2h根據改良的Zea-Longa線栓法制作大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，90min后實施再灌注。分別于再灌注后24h、48h快速將大鼠斷頭處死，完整剝取大腦組織，其中每組的半數(shù)制成腦組織勻漿液用于NO檢測，另半數(shù)采用心臟灌注的方法固定大腦，用于染色以觀察細胞凋亡和病理變化。將腦組織勻漿液標本采用硝酸還原酶法

5、測定NO含量，嚴格按試劑盒操作步驟完成。將用多聚甲醛固定的腦組織標本采用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口術端標記(TUNEL)染色法檢測神經細胞凋亡數(shù)。高倍鏡下觀察，細胞核內棕黃色為陽性細胞，分別選擇5個高倍視野計數(shù)TUNEL陽性標記細胞，計算平均每個高倍視野下100個細胞中的陽性細胞數(shù)。運用HE染色方法觀察活血開竅湯對腦缺血損傷的組織形態(tài)學改變。
　　 結果:
　　 經實驗觀察，活血開竅湯治療組大鼠缺血再灌注24h、

6、48h后，病理顯示模型組大鼠的腦組織神經細胞損傷數(shù)目較多，且損傷嚴重，而治療組顯示神經細胞損傷程度明顯較輕。經測定，模型組大鼠腦組織中NO的含量及神經細胞凋亡數(shù)明顯升高(P＜0.01)，活血開竅湯治療組NO的含量較模型組明顯下降(P＜0.05)，細胞凋亡數(shù)較模型組也顯著減少(P＜0.01)。
　　 結論：
　　 活血開竅湯能改善缺血再灌注大鼠的神經功能，可通過減少腦組織中NO的含量減輕其對腦組織的損害，實驗結果亦表明，活