大鼠腦缺血再灌注損傷Cathepsin D介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與ERK1-2信號(hào)通路的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型，檢測(cè)腦梗死體積、腦缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)Cat D、p-ERK1/2及細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)執(zhí)行蛋白酶Caspase-3的表達(dá)，以及使用Cat D的抑制劑Pepstatin A干預(yù)后對(duì)腦梗死體積、p-ERK1/2、Caspase-3表達(dá)的影響，來(lái)推測(cè)二者之間可能存在的相關(guān)關(guān)系，旨在探討大鼠腦缺血再灌注后C

2、at D介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與ERK1/2信號(hào)通路的關(guān)系及Pepstatin A對(duì)腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)保護(hù)功能。
　　方法:
　　清潔級(jí)健康雄性Sprague-Dawley大鼠72只，體重260～300g，10～12周齡。應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為假手術(shù)組（12只）、生理鹽水對(duì)照組（30只）及Pepstatin A干預(yù)組（30只），其中對(duì)照組及干預(yù)組分別按不同時(shí)間點(diǎn)設(shè)置為缺血再灌注后6h、12h、24h和48h亞組（48h亞組為

3、12只，其余各亞組為6只）。假手術(shù)組、生理鹽水對(duì)照組48h亞組、Pepstatin A干預(yù)組48h亞組中隨機(jī)取6只用于梗死體積檢測(cè)，另6只除同其余各組參與Cat D、p-ERK1/2 western blot檢測(cè)外，另行Caspase-3 western blot檢測(cè)。干預(yù)組在腦缺血再灌注即刻和以后每12小時(shí)各腹腔注射Pepstatin A注射液0.2ml/10g，對(duì)照組于相同時(shí)間點(diǎn)注射等量生理鹽水。
　　結(jié)果:
　　1.模

4、型成功率為81.82％。
　　2.行為學(xué)評(píng)價(jià)顯示，假手術(shù)組的神經(jīng)功能缺損評(píng)分為0分，相同時(shí)間點(diǎn)Pepstatin A干預(yù)組的神經(jīng)功能缺損評(píng)分均顯著性低于生理鹽水對(duì)照組（P均<0.05）。
　　3.TTC染色顯示，假手術(shù)組均未見(jiàn)梗死灶，生理鹽水對(duì)照組48h亞組及Pepstatin A干預(yù)組48h亞組相對(duì)腦梗死體積分別為（26.40±1.45）%和（13.14±1.94）%，具有顯著性差異（P=0.000）。
　　4.We

5、stern blot法檢測(cè)Cat D蛋白的表達(dá)：生理鹽水對(duì)照組Cathepsin D蛋白的表達(dá)在腦缺血再灌注后6h、12h、24h呈上升趨勢(shì)，24h達(dá)到高峰，48h仍維持在較高水平，與假手術(shù)組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）；Pepstatin A干預(yù)組該蛋白的表達(dá)在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)較生理鹽水對(duì)照組均明顯減少（P均<0.05）。
　　5.Western blot法檢測(cè)p-ERK1/2蛋白的表達(dá)：生理鹽水對(duì)照組p-ERK1/2

6、蛋白的表達(dá)在腦缺血再灌注后6h、12h呈上升趨勢(shì)，12h達(dá)到高峰，24h仍維持在較高水平，48h有所下降，但仍高于假手術(shù)組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）；Pepstatin A干預(yù)組該蛋白的表達(dá)在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)較生理鹽水對(duì)照組有所增加（P均<0.05）。
　　6.Western blot法檢測(cè)Caspase-3蛋白的表達(dá)：Caspase-3蛋白表達(dá)的相對(duì)灰度值在假手術(shù)組、生理鹽水對(duì)照組48h亞組、Pepstatin A干預(yù)組