高速逆流色譜分離純化中草藥廣金錢草和連翹活性成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜(high speed counter-current chromatography,HSCCC)是1982年由Ito博士提出的新型的液液分配色譜，廣泛應(yīng)用于各種天然產(chǎn)物的分離提純。本文利用離線二維HSCCC分離廣金錢草乙酸乙酯部分得到四種活性物質(zhì)，梯度洗脫HSCCC分離連翹乙酸乙酯部分得到四種活性物質(zhì)，采用絡(luò)合HSCCC分離得到香草酸和β-谷甾醇，探討了高速逆流色譜分離的最優(yōu)條件，并對分離出來的物質(zhì)進行了結(jié)構(gòu)鑒定，主要內(nèi)容

2、如下:
　　(1)考察了HSCCC分離廣金錢草乙酸乙酯萃取部位的最優(yōu)分離條件。采取兩相溶劑體系正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶2∶1∶2，v/v)進行離線二維HSCCC可以達(dá)到滿意的分離效果。第一維HSCCC以溶劑體系上相作為固定相，下相作為流動相，頭-尾洗脫模式，轉(zhuǎn)速為900 rpm，流速為2.0 mL/min。循環(huán)HSCCC作為第二維用來分離第一維HSCCC里面不純的部分。兩次固定相保留率均為53.8％。通過離線二維HSCCC

3、分離，從670 mg乙酸乙酯部位中分離純化得到5.6 mg香草酸、4.0 mgβ-谷甾醇、10.2 mg芒柄花素和4.5 mg香橙素。高效液相色譜(HPLC)分析結(jié)果顯示分離后四種物質(zhì)的純度都超過95％，采用UV、HPLC-MS和1HNMR方法分析鑒定出廣金錢草活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明了離線二維HSCCC是一種從復(fù)雜體系分離化合物的有效方法，并可以顯著改善色譜分辨率及峰容量，能有效解決因峰重疊引起的分離純度不高、回收率較低等問題。<

4、br>　　(2)研究了HSCCC分離連翹乙酸乙酯萃取部位的最優(yōu)分離條件。采取兩相溶劑體系為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶4∶1∶4，v/v)和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶4∶2∶3，v/v)梯度洗脫可以達(dá)到滿意的分離效果。在此最優(yōu)條件下，從350 mg乙酸乙酯部位中分離純化得到12.8mg連翹苷、5.3 mg異落葉松脂素-9'-O-β-D-葡萄糖苷、21.2 mg松脂素和8.3 mg連翹脂素。HPLC分析結(jié)果顯示分離后四種物質(zhì)的純

5、度都超過95％，并采用UV、HPLC-MS和1HNMR方法分析鑒定出連翹活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)。實驗結(jié)果表明梯度洗脫HSCCC是一種從天然產(chǎn)物里分離出極性相差較大的化合物的有效方法。
　　(3)實驗一在廣金錢草乙酸乙酯活性成分中通過循環(huán)HSCCC得到了香草酸和β-谷甾醇，本章研究了絡(luò)合HSCCC分離香草酸和β-谷甾醇的最優(yōu)分離條件。通過在水相中加入0.1 mol/L Cu2+絡(luò)合劑可以改變香草酸和β-谷甾醇在兩相溶劑體系正己烷-乙酸乙