蛻膜細胞通過上調(diào)滋養(yǎng)細胞基質(zhì)金屬蛋白酶的表達促進其遷移的作用研究.pdf

1、目的:胚胎植入子宮內(nèi)膜是妊娠建立的初始過程和胚胎持續(xù)發(fā)育的關(guān)鍵。胚胎植入及早期妊娠時，母胎界面位于與滋養(yǎng)層直接接觸的蛻膜上。人類的成功妊娠需要來自胎兒的滋養(yǎng)層細胞對子宮基質(zhì)的有節(jié)制地侵入。滋養(yǎng)細胞通過降解細胞外基質(zhì)使得其能夠浸潤生長，這一過程需要基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs及其天然的抑制劑TIMPs處于一個平衡狀態(tài)。滋養(yǎng)細胞的侵入作用與其周圍環(huán)境有著密切的聯(lián)系，其中子宮蛻膜組織對其的影響尤為重要。然而，子宮蛻膜細胞對滋養(yǎng)細胞的遷移作用和具體分

2、子過程還有待于進一步研究。本研究觀察蛻膜細胞條件培養(yǎng)液對滋養(yǎng)細胞遷移能力及相關(guān)調(diào)節(jié)基因（如MMPs、TIMPs等）表達的影響。
　　方法:我們利用原代培養(yǎng)細胞技術(shù)，培養(yǎng)人蛻膜細胞以及人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞，并對細胞進行免疫熒光染色，檢測細胞的上皮細胞分子標記角蛋白(Cytokeratin，CK)和間質(zhì)細胞分子標記波形蛋白（Vimentin），以確定原代培養(yǎng)是否成功。我們用收集到的兩種細胞的條件培養(yǎng)液（分別命名為DSC-CM和EMC-C

3、M），對滋養(yǎng)細胞癌JAR分別進行預處理，通過Transwell比較兩種處理對滋養(yǎng)細胞遷移能力的作用，并通過Q-PCR和Western blot比較兩者的MPs和TIMPs表達水平的區(qū)別。
　　結(jié)果:應用細胞免疫熒光染色鑒定體外培養(yǎng)的蛻膜和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞，我們發(fā)現(xiàn)95％以上的細胞為波形蛋白陽性，僅極少數(shù)細胞為角蛋白陽性細胞（5％以下），證明我們的原代培養(yǎng)確實得到了人蛻膜細胞和人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞。Transwell結(jié)果顯示，DSC-

4、CM處理組的滋養(yǎng)細胞穿出小室的細胞數(shù)大于EMC-CM處理組和空白組，我們的結(jié)果提示DSC-CM具有促進滋養(yǎng)細胞遷移的作用。Q-PCR結(jié)果顯示，DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細胞MMP2和MMP9 mRNA的表達水平顯著高于EMC-CM處理組;而TIMP1和TIMP2 mRNA在兩組間無明顯差異。Western blot結(jié)果提示DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細胞MMP2的表達高于EMC-CM處理組。
　　結(jié)論:結(jié)果顯示:與人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞相比