青光眼致病基因的篩選及定位.pdf

1、目的：對(duì)中國漢族原發(fā)性青光眼家系進(jìn)行遺傳連鎖分析及基因測序，篩選鑒定新致病基因位點(diǎn)和/或新致病基因及鑒定已知基因的新突變，以確認(rèn)致病基因并闡明致病機(jī)理。 方法：1．采集中國漢族原發(fā)性青光眼家系的臨床資料和血樣標(biāo)本，提取血樣標(biāo)本中DNA，建立病人的臨床信息數(shù)據(jù)庫。2.針對(duì)原發(fā)性青光眼的已知基因，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行測序，排除已知基因。應(yīng)用遺傳連鎖方法，選擇已知位點(diǎn)及已知基因物理位置附近的STR(short tandom repeatmar

2、kers)標(biāo)記物進(jìn)行已知基因及已知位點(diǎn)的篩查。3．對(duì)已排除已知位點(diǎn)及基因的家系，用382個(gè)STR標(biāo)記物(ABI PRISM Linkage MappingSets V2.5-MD)，PCR擴(kuò)增其片段，采用ABI3100遺傳分析儀進(jìn)行全基因組的掃描。4．用國際公認(rèn)的遺傳連鎖分析方法，根據(jù)等位基因(單倍體)分型結(jié)果，應(yīng)用兩點(diǎn)法，分別計(jì)算STR標(biāo)記物的LOD值(LodScore值，表明疾病基因與該位點(diǎn)連鎖的緊密性大小)，以最大LOD值確定陽性

3、位點(diǎn)。5．在陽性位點(diǎn)附近，根據(jù)熒光標(biāo)記的STR(singlenucleotide polymophism)基因型檢測結(jié)果，進(jìn)行更精細(xì)定位，確定疾病基因的最小遺傳間距MGI(Minimum Genetic Interval)。在MGI內(nèi)，通過候選基因法篩選其致病基因及突變。 結(jié)果：1．收集了中國漢族原發(fā)性青光眼家系的臨床及遺傳資料。2．完成了對(duì)原發(fā)性開角型青光眼已知基因的測序，未發(fā)現(xiàn)已知基因的突變。對(duì)已知遺傳位點(diǎn)及基因的連鎖分析發(fā)

4、現(xiàn)其θ=0.0時(shí)，LOD值均<0，有幾個(gè)標(biāo)記物的LOD值>0，但在其附近增加新的標(biāo)記物其LOD值均<0，排除了已知基因及遺傳連鎖位點(diǎn)。3．完成了2個(gè)原發(fā)性青光眼家系的全基因組382個(gè)STR(short tandom repeat markers)標(biāo)記物的掃描。4．全基因組掃描發(fā)現(xiàn)，當(dāng)θ=0.0時(shí)，0955家系在1號(hào)、2號(hào)、8號(hào)染色體等幾個(gè)位點(diǎn)的IrOD值均>1，提示有連鎖的可能性。0956家系在15號(hào)、19號(hào)染色體上2個(gè)位點(diǎn)的LOD值>

5、0，提示有連鎖的可能性。5.對(duì)可能的陽性位點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步的確定，通過合成新的STR標(biāo)記物，對(duì)陽性位點(diǎn)進(jìn)行確認(rèn)和排除，0955已經(jīng)排除了1、8號(hào)染色體的幾個(gè)位點(diǎn)，現(xiàn)已完成了2號(hào)染色體可疑陽性位點(diǎn)的5個(gè)候選基因的測序工作，進(jìn)一步的確認(rèn)工作還在進(jìn)行中。0956家系已排除了15和19號(hào)染色體的2個(gè)位點(diǎn)，進(jìn)一步的分析工作正在進(jìn)行中。 結(jié)論：1．我們收集了2個(gè)中國漢族原發(fā)性青光眼家系的臨床資料，豐富了青光眼的遺傳資源信息。2．發(fā)現(xiàn)了開角性青光