放線菌HNS2-2的分離、鑒定及抗煙草花葉病毒活性產(chǎn)物的研究.pdf

1、植物病毒病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)生普遍、危害嚴(yán)重的一類病害，每年給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)有的化學(xué)藥物對(duì)植物病毒病的防治效果不佳，且對(duì)生態(tài)環(huán)境、人畜生存質(zhì)量有負(fù)面影響。植物源農(nóng)藥因植物資源有限、成本高、效果不穩(wěn)定等因素，難以商品化生產(chǎn)。因此，篩選、開發(fā)微生物源抗植物病毒活性物質(zhì)是防治植物病毒的主要研究方向。 放線菌(Actinomycetes)是與人類關(guān)系極為密切的一類微生物，它們廣泛存在于不同自然生態(tài)環(huán)境中，可以產(chǎn)生多種抗生素及

2、非抗生素類活性產(chǎn)物，應(yīng)用于人類細(xì)菌病、真菌病、寄生蟲病、腫瘤甚至病毒病的防治。放線菌中以鏈霉菌合成抗生素次生代謝產(chǎn)物的能力最強(qiáng)，放線菌產(chǎn)生的抗生素中有90％是以鏈霉菌作為生產(chǎn)菌種生產(chǎn)的?，F(xiàn)已從鏈霉菌中得到土霉素、金霉素、氯霉素、紅霉素等氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、多烯類、聚醚類抗生素。但對(duì)于防治植物病害的抗生素，尤其是抗植物病毒的活性物質(zhì)，卻很少報(bào)道。 本文從土壤放線菌的分離、抗TMV菌株的篩選、菌株的鑒定、搖瓶發(fā)酵條件的優(yōu)化以及活

3、性物質(zhì)追蹤分析等方面進(jìn)行了系統(tǒng)研究，結(jié)果如下： 1)為了提高土壤中放線菌的分離效率，解決放線茵分離培養(yǎng)中真菌、細(xì)菌污染問題，采用多種分離培養(yǎng)基和不同濃度抑制劑，從土壤樣品中選擇性分離放線菌，試驗(yàn)結(jié)果表明，土樣于90℃條件下加熱處理1h，在10倍稀釋的土壤懸浮液中，加入0．05％SDS，于40℃振蕩20min后，用稀釋平板涂布法接種于含有重鉻酸鉀(質(zhì)量濃度為100mg/L)高氏1號(hào)培養(yǎng)基平板上，28℃培養(yǎng)6、7d，生長的放線菌數(shù)量

4、多，且細(xì)菌、真菌數(shù)量少，最適于放線菌分離。采用此種方法從117份土樣中分離得到放線菌菌株413個(gè)。 2)采用摩擦接種法接種煙草花葉病毒(TMV)系統(tǒng)侵染寄主普通煙草K326、枯斑寄主曼陀羅，反復(fù)篩選，得到具有抗TMV活性的放線菌菌株HNS2-2。 3)通過對(duì)HNS2-2菌株進(jìn)行培養(yǎng)性狀、形態(tài)特征、生理生化特征、16S rDNA序列的測定及其系統(tǒng)發(fā)育分析的研究，表明HNS2-2為一種鏈霉菌，與草綠色鏈霉菌的模式菌株S.he

5、rbaricolor strain NRRL B-3299T的序列同源性為100％，因此歸入草綠色鏈霉菌，16S rDNA序列已在GenBank注冊(cè)，登錄序列號(hào)為EU035296。 4)進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基篩選、發(fā)酵溫度、初始pH、接種量、裝液量、種齡、發(fā)酵時(shí)間等條件優(yōu)化，得出發(fā)酵培養(yǎng)基為10％大米粉、2.2％黃豆粉為主要成分，最佳發(fā)酵條件為取種齡24h按接種量8％接種，在初始pH7.2-7.4、30℃、220r/min條件下進(jìn)行