土壤放線菌的篩選、鑒定及其活性代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、放線菌由于其產(chǎn)生抗生素、酶及其抑制劑等有用生物活性物質(zhì),具有巨大經(jīng)濟價值,至今發(fā)現(xiàn)的兩萬種生物活性物質(zhì)中,約70％是由放線菌產(chǎn)生的。而土壤又是放線菌含量最豐富的地方,因此開發(fā)土壤放線菌具有十分重要的意義。本研究旨在土壤中分離出對多種植物病原真菌具有強烈拮抗作用的放線菌,對菌株進(jìn)行鑒定,并對其抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行分離,尋找新型農(nóng)用抗生素的產(chǎn)生菌來源,具體研究內(nèi)容如下:
　　 (1)放線菌的分離。對來自黑龍江省、湖北省、山東省、貴州省、

2、河北省五個省份的九份土樣進(jìn)行自然干燥等預(yù)處理后,采用選擇性分離培養(yǎng)基腐殖酸培養(yǎng)基加50μg/mL的重鉻酸鉀進(jìn)行放線菌的選擇性分離。共分離得到101株放線菌。
　　 (2)高活性菌株的篩選。采用管碟法測定了101株放線菌發(fā)酵液對細(xì)菌的抑菌活性,其中有31株放線菌對枯草芽孢桿菌和藤黃微球菌的抑菌圈直徑≥15mm,其中W2、W13、B5、Q5、Q10這5株放線菌的抑菌圈直徑都在20mm以上。
　　 (3)放線菌的分類學(xué)研究。結(jié)

3、合經(jīng)典分類和分子生物學(xué)中16SrRNA分類,對W2、W13、Q1、Q2、Q7這5株放線菌的分類研究表明:其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征均與鏈霉菌屬一致;其中W2號放線菌同鏈霉菌Streptomyces neyagawaensis ATCC 27449的相似性達(dá)到99％;Q1號放線菌同鏈霉菌Streptomyces corchorusii 088-68-1的相似性達(dá)到99％;Q2號放線菌同鏈霉菌Streptomyces lavendu

4、lae ZGO429的相似性達(dá)到99％;Q7號放線菌同鏈霉菌Streptomycessp.VTTE-99-1333(B306)的相似性達(dá)到99％;W13號放線菌同鏈霉菌Streptomyces thermocarboxydus AT37的相似性達(dá)到99％。進(jìn)一步確定這5株放線菌均屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)。
　　 (4)發(fā)酵粗提物對真菌的抑制研究。對細(xì)菌有較好抑菌活性的W2、W13、B5、Q5、Q10這5株放線菌發(fā)

5、酵粗提物,進(jìn)行了對9種致病真菌的抑菌活性研究,結(jié)果表明,其發(fā)酵粗提物至少對4種真菌有抑菌作用,對6種以上真菌有抑制作用的菌株有2株,分別為W2和Q5,其中W2菌株對7種真菌都有抑菌作用,并且抑制率都在50％以上。
　　 (5)發(fā)酵粗提物的分離。將這5株放線菌的發(fā)酵粗提物進(jìn)行了分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果顯示,從W2中分離出了2種化合物,其中化合物7-prenylindole具有抑制真菌的作用,化合物borrelidin具有抗癌,抑

6、菌,除草活性等多種用途;從W13中分離出了1種新的化合物;從B5中分離出了2種化合物conglobatin和armstrienB;從Q5中分離出1種化合物;從Q10中分離出2種化合物
　　 (6)化合物的活性驗證。進(jìn)行了化合物7-prenylindole和borrelidin的抑真菌活性測定,結(jié)果表明:化合物7-prenylindole在濃度為100μg/ml,時。對6種致病真菌都有抑制活性。Borrelidin在濃度為100μ