黑線倉(cāng)鼠RFRP-3克隆及其對(duì)繁殖的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、我國(guó)農(nóng)田鼠害問(wèn)題嚴(yán)重，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了極大困擾；并且害鼠能傳播疾病，對(duì)人類生存也是一個(gè)嚴(yán)重威脅。因此鼠害治理工作的開(kāi)展顯得尤為必要，其成功防治將具有重要且深遠(yuǎn)的意義。黑線倉(cāng)鼠（Cricetulus barabensis）是我國(guó)農(nóng)田的主要鼠種，繁殖力強(qiáng)且危害嚴(yán)重，并具有季節(jié)性暴發(fā)的特點(diǎn)。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)黑線倉(cāng)鼠繁殖候選基因RFRP-3在中樞組織及外周組織的表達(dá)模式，期望揭示黑線倉(cāng)鼠繁殖的內(nèi)在分子調(diào)控機(jī)制，為進(jìn)一步深入闡明黑線倉(cāng)鼠種群動(dòng)態(tài)

2、年際波動(dòng)機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　研究選取黑線倉(cāng)鼠為實(shí)驗(yàn)材料，采用RT-PCR技術(shù)克隆了繁殖相關(guān)基因RFRP cDNA序列；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了RFRP mRNA在黑線倉(cāng)鼠成體不同組織的表達(dá)情況；并在此基礎(chǔ)上對(duì)兩個(gè)重要的通路節(jié)點(diǎn)基因RFRP和GnR H在不同發(fā)育時(shí)期、不同發(fā)情時(shí)期及不同季節(jié)繁殖軸組織中的表達(dá)水平進(jìn)行了研究，獲得如下結(jié)果：
　　1、克隆獲得黑線倉(cāng)鼠RFRP基因cDNA共643 bp，包括570 bp的

3、ORF，共編碼SPAPANKVPHSAANLPLRF-NH2（黑線倉(cāng)鼠RFRP-1）和TLSRVPSLPQRF-NH2（黑線倉(cāng)鼠RF RP-3）兩種RF酰胺相關(guān)肽（RFRPs）序列。RFRP基因序列生物信息學(xué)分析顯示，RFRP是一種跨膜蛋白，且其結(jié)構(gòu)在進(jìn)化過(guò)程中相對(duì)保守，預(yù)示了RFRP具有保守且重要的生物學(xué)功能。
　　2、RFRP mRN A在黑線倉(cāng)鼠表達(dá)較為廣泛，下丘腦、子宮、卵巢、睪丸組織中均有RFRP mRNA表達(dá)，提示RF

4、RP-3功能的多樣性，且RFRP mRNA在下丘腦的表達(dá)量極顯著高于其他組織（P＜0.05），提示RFRP-3的作用可能主要通過(guò)腦內(nèi)機(jī)制實(shí)現(xiàn)。
　　3、黑線倉(cāng)鼠不同發(fā)育時(shí)期、不同發(fā)情時(shí)期RFRP mRNA的表達(dá)量存在顯著差異，呈現(xiàn)出以中樞組織（下丘腦）表達(dá)為主、外周組織（卵巢、子宮、睪丸）表達(dá)為輔的特點(diǎn)。與雌性老體相比，雌性成體下丘腦中RFRP mRNA的表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）；與雄性亞成體和老體相比，雄性成體下丘腦中RF

5、RP mRNA的表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果表明RFRP mRNA在雌性黑線倉(cāng)鼠的表達(dá)與RFRP-3抑制生殖的功能相一致，RFRP mRNA在雄性個(gè)體的表達(dá)與RFRP-3抑制生殖的功能不完全一致。同時(shí)RFRP mRNA在雌性成體發(fā)情期的表達(dá)量顯著低于成體其他發(fā)情時(shí)期（P＜0.05），這一結(jié)果也進(jìn)一步表明了RFRP-3可能抑制雌性黑線倉(cāng)鼠的生殖。
　　4、四季黑線倉(cāng)鼠下丘腦中RFRP mRNA的表達(dá)量顯著高于外周性腺組織（P

6、＜0.05）。與春季、秋季和冬季的雌性個(gè)體相比，夏季雌性個(gè)體下丘腦中RFRP mRNA的表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）；與春季、夏季和秋季的雄性個(gè)體相比，冬季雄性個(gè)體下丘腦中RFRP mRNA的表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果提示在不同季節(jié)RFRP mRNA的表達(dá)可能受到光周期的影響，并且光周期對(duì)RFRP-3的調(diào)控機(jī)制可能存在性別差異。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)血清中MT與RF RP-3濃度的變化表現(xiàn)出了一致性，表明RF RP-3的合成分泌可能

7、依賴于體內(nèi)光信號(hào)MT的釋放，并且RFRP-3可能受到MT的直接調(diào)節(jié)。雌性夏季下丘腦中RFRP mRNA的表達(dá)量高于秋季（P＜0.05），雌性夏季下丘腦中GnRH mRNA的表達(dá)量低于秋季（P＜0.05）；雄性冬季下丘腦中RFRP mRNA的表達(dá)量高于春季（P＜0.05），雄性冬季下丘腦中GnRH mRNA的表達(dá)量低于春季（P＜0.05）。結(jié)果表明RFRP mRNA在黑線倉(cāng)鼠的表達(dá)與RFRP-3抑制黑線倉(cāng)鼠季節(jié)性繁殖的功能相一致，這暗示了